上海巴斯德所高產流感疫苗研發取得新進展

　　近期，國際學術期刊Vaccine 在線發表了中國科學院上海巴斯德研究所分子病毒課題組的研究論文A Vero-cell-adapted vaccine donor strain of influenza A virus generated by serial passages（《通過連續傳代獲得甲型流感病毒Vero細胞適應性疫苗株》）。

　　流感病毒一直危害人類健康，其中甲型流感病毒因變異快、宿主范圍廣、亞型和毒株眾多等原因極易引發感染。目前，預防流感最有效的方法是接種流感疫苗。20世紀40年代起，通過接種雞胚擴增得到流感疫苗毒株一直是生產流感疫苗的通用方法，然而不斷增長的疫苗和疫情防控需求使雞胚生產平臺中雞胚供應不足、卵清蛋白過敏以及產量有限等諸多缺陷越來越明顯。因此, 研發易于擴大化培養、無過敏反應、并能夠更好地保持抗原性的哺乳動物細胞培養系統成為生產流感疫苗的新一代熱門介質。非洲綠猿猴腎細胞系（Vero）、犬腎細胞系（MDCK）以及胚胎視網膜細胞系（PER.C6）都被選為人用流感疫苗的生產介質，其中Vero細胞系已成功用于人用狂犬、脊灰等疫苗的生產，安全性得到充分認證。然而，目前通用的流感病毒疫苗骨架株PR8病毒在Vero細胞上的生長非常有限，導致Vero細胞流感疫苗產量受限，如何提高PR8疫苗株在Vero細胞上的產量和效率是將Vero細胞開發成流感疫苗二倍體細胞生產介質的關鍵技術。

　　上海巴斯德所副研究員徐柯及博士研究生胡偉斌、張宏等在孫兵研究員的指導下，將PR8病毒在Vero細胞上連續進行20次傳代獲得了Vero細胞的適應株PR8-p20。通過病毒全基因組測序以及反向遺傳學構建重組病毒，最終鑒定到病毒內部基因NP、PB1、PA和NS1上的四個氨基酸位點突變決定了PR8病毒在Vero細胞上的適應性，并將含有這四個突變位點的PR8病毒命名為PR8-4mut。病毒生長曲線結果表明，PR8-4mut病毒比現有的PR8疫苗株生長更快，可在病毒接種后48小時即達到最高病毒滴度，相對PR8病毒滴度提高1000倍。因此，以PR8-4mut作為疫苗骨架株構建的禽流感（H5N1、H7N1和H9N2）和人流感（H1N1和H3N2）疫苗株在Vero細胞上的產量都可大幅提高，而且研究得到的Vero細胞適應株PR8-4mut在小鼠和雞胚上的致病力與PR8相當，并保持胰酶依賴性。研究結果表明，PR8-4mut是能夠包裝各種亞型流感病毒HA和NA，保持分離株原始抗原性的甲型流感疫苗Vero細胞骨架株。

　　該項研究獲得了國家自然科學基金、國家“863”項目以及賽諾菲安萬特——上海生命科學研究院青年人才等項目的支持。