中國科研工作者對抗體試劑問題的反思

　　2015年5月19日 Nature雜志從美國和加拿大幾位資深科學家的親身經歷，深度闡述了目前抗體試劑的現狀與問題，給全世界科研工作者敲響了警鐘。身為中國科研工作者，我們遇到的抗體試劑問題只怕比國外同行來得更多，當下除了抱怨，我們更應深刻反思：如何才能獲得高質量、合適的抗體試劑。

　　獲得高質量、合適的抗體試劑也并非難事，我們需要在以下三個方面加以甄別：1.優秀的抗體供應商；2.過硬的冷鏈物流體系；3.正規的銷售（直銷/分銷）渠道。

　　1. 優秀的抗體供應商

　　優秀的抗體供應商應具備以下條件或者能為客戶提供以下信息：抗原序列選擇、抗體純化方式、抗體驗證數據、應用指南。

　　i. 抗原序列選擇

　　抗原序列選擇至關重要，直接決定了抗體的特異性/低交叉反應和抗體產量，因此抗原序列選擇不僅要保證全基因組內同源序列最低，同時還要排除信號肽和蛋白跨膜區序列。

　　ii. 抗體純化

　　抗體純化目前主流的三種方式分別是：鹽析法粗純、Protein A/G通用型純化和特異抗原純化柱，三種方式的純化效果和抗體效價依次提高。其中Protein A/G通用型純化的效果和成本適中，目前大部分抗體試劑公司都采用該方式進行大規模抗體生產。要想獲得較高質量的抗體，需要通過特異抗原純化柱，但由于涉及固定特異抗原等操作，成本相應是最高的，然而，使用該方法純化出來的抗體純度和特異性最高。

　　iii. 抗體驗證數據

　　目前很多供應商都有抗體驗證數據，但我們并不知道這些驗證數據的具體來源。很多抗體都有WB驗證數據，但很少有供應商標明WB是在哪些細胞系內驗證，如果是過表達的細胞系，那WB驗證意義就不大了。同樣，免疫組化或免疫熒光也存在類似問題，驗證的數據具體來源于哪種組織、哪種病理樣本鮮有提及。而來源不同，實驗結果會千差萬別。供應商往往用一種最容易得到實驗室數據的樣本做實驗，但這樣的抗體用到我們自己的實驗時，往往會有多種問題出現。

　　iv. 應用指南

　　抗體供應商一般會根據驗證數據推薦相關的應用，所以驗證數據對于應用有決定性作用。應該特別注意，同一支抗體可以做WB，卻并不一定適合于免疫熒光或免疫組化，反之亦然。因此，供應商的抗體驗證數據就顯得非常重要了。

　　以上列出了優秀抗體供應商的4條硬性要求，現實中有哪些能很好地做到以上幾點呢？下面以Sigma-Aldrich提供的HPA金標抗體為例。HPA金標抗體由Human Protein Atlas (HPA)Project設計并驗證。

　　1）HPA金標抗體抗原選擇

　　HPA金標抗體的免疫抗原是重組人蛋白表位識別標簽(PrESTs)，表位識別標簽一般含有50-150個氨基酸。表位識別標簽經過設計和篩選，使得它們含有獨特的表位，并且適合激發高特異性的抗體產生。通過對人全基因組掃描的方式，確保用于生產抗體的蛋白表位識別標簽與其它蛋白有最低的同源性。同時，抗原表位還會排除信號肽和蛋白跨膜區。

　　2）HPA金標抗體親和層析純化

　　HPA金標抗體通過親和層析方式進行純化(以PrESTs抗原作為配基，特異抗原純化柱)，采用三步法免疫層析的純化工藝：HisABP特異性標簽去除，PrESTs特異性捕獲，最后通過排阻色譜進行緩沖液的交換，不僅保證了抗體的純度，同時有利于抗體長期保存。

　　3）HPA金標抗體驗證

　　每一支HPA金標抗體都經過蛋白芯片、免疫組化、WB和免疫熒光的實驗驗證，驗證的數據量不僅巨大--每支抗體超過700張實驗驗證圖片（病理學家認證并注釋）在線查詢，而且，驗證數據是來自于不同組織和細胞系樣本，還會結合參考文獻以及生物信息學預測，確保每一個實驗數據的可靠性。

　　4）HPA金標抗體應用指南

　　HPA金標抗體主要以免疫組化/免疫熒光為主，大部分抗體同時支持WB實驗。基于多種組織或者細胞的驗證結果，給廣大科研工作者提供了寶貴的數據參考。

　　綜上，HPA金標抗體可稱得上是優質抗體典范，而Sigma-Aldrich算是優秀的抗體供應商之一。

　　2. 過硬的冷鏈物流體系

　　目前冷鏈物流體系已經非常成熟，各家供應商一般都能保證抗體的低溫運輸。對于供應商而言，主要是舍得投入，這一點做得比較突出的有Sigma-Aldrich，抗體收到后，一般冰盒還能堅持2-3天，足以讓使用者安心實驗。

　　3. 正規的銷售（直銷/分銷）渠道

　　在國內，銷售渠道是問題突出的關鍵環節，尤以假抗體試劑為甚，很多產品在包裝上其實是可以辨別的（科研工作者很少關注，往往以價格為導向）。在利益的驅使下，部分經銷商經常會自己制作抗體試劑，貼上假冒標簽以次充好；另一個很普遍的現象是從正規渠道購得抗體試劑，通過小作坊稀釋分裝后，再出售給科研工作者。無論是以次充好，還是稀釋分裝，都會給科研工作者都帶來很多實驗風險，最后買單的始終是廣大中國科研工作者，不僅耗費金錢和人力，更難以彌補的是寶貴的時間成本。

　　因此在購買渠道上，建議大家盡量從官方指定經銷商處購買抗體試劑，抑制假貨的流通。同時，隨著電子商務平臺的成熟，大家可以直接在各大官方網站訂購試劑，這是最安全便捷的購買渠道。關于這點，免不了再次提及Sigma-Aldrich，Sigma-Aldrich是國內最早實行電子商務的生命科學產品供應商，并且以直銷為主導，避免了中間流通環節的問題，加上其強大的物流體系，很大程度上降低了銷售環節可能帶來的實驗風險。

　　面對紛繁復雜的抗體市場，建議大家購買抗體試劑時謹慎選擇，切勿貪圖小利，通過正規銷售渠道購買優秀供應商的抗體，最大限度降低因抗體質量問題給我們帶來的損失。