非靶代謝組學無偏向性檢測所有內源小分子代謝物,通過全譜分析對小分子代謝物定性和相對定量,了解生物體內小分子代謝物的整體代謝特征和變化規律。基于代謝全譜的功能探究,便于從整體水平,在復雜的代謝網絡中尋找潛在的重要通路,是解決復雜生物學問題的重要途經,也是許多科學研究進一步深入的前提。
可靠的檢測平臺和分析軟件為高質量檢測數據保駕護航
全譜分析技術流程
以上為代謝物全譜分析的基本流程,下面我們開始細述各類細節。
1、 樣本保存
離體樣本必須在液氮速凍后-80℃保存,嚴禁反復凍融。
2、 樣品前處理
在代謝組學研究中,最常用的樣本前處理方式是有機溶劑沉淀蛋白,接著使用高速離心或者超濾技術移除沉淀。研究者們喜歡用有機溶劑例如甲醇進行一步提取,既縮短前處理時間,又可以避免過多的雜質混入,縮短色譜柱壽命,影響檢測結果。在某品牌眼藥水全譜分析過程中,代謝物提取步驟為加甲醇渦旋、靜止、離心和過濾收集上清。
3、 代謝物檢測
LC-MS、GC-MS或核磁共振對代謝物進行定性和定量檢測,如Thermo, Ultimate 3000LC +Thermo Scientific? Q Exactive? HF液質聯用儀,以液相色譜作為分離系統,質譜為檢測系統,樣品在質譜部分和流動相分離,被離子化后,經質譜的質量分析器將離子碎片按質量數分開,經檢測器得到質譜圖,獲得原始數據。
4、 離子流圖
(ESI+)表示正離子檢測模式,即在檢測過程中質量分析器只掃描正電荷離子而濾除負電荷離子,從而獲得正電荷離子的信息;(ESI-)表示負離子檢測模式,原理同正離子模
5、數據預處理
數據處理的軟件眾多,針對Thermo Scientific? Q Exactive? HF原始數據對應專門分析軟件Compound discoverer 3軟件,可對LC/MS檢測數據進行提取和預處理,整理成二維數據矩陣形式,包含保留時間RT(Retention time)、分子量(Molecular Weight)、觀察量(樣本名稱)、峰強度等信息,進行后續去全譜鑒定。
6、 全譜鑒定
根據LC-MS產生的二級質譜圖或者Mass值基于mzCloud數據庫和網絡數據庫Metlin進行全譜鑒定,對代謝物注釋和分類。例如某品牌眼藥水的全譜分析鑒定其主要包括亞油酸及其衍生物、脂肪酸及其衍生物、氨基酸及其衍生物和吲哚基羧酸及其衍生物等。
全譜分析技術優勢
全譜分析應用
代謝物全譜分析可廣泛應用于農業、醫療和生產各個領域中,豐富的樣本前處理經驗,高通量的質譜檢測和專業的數據處理分析,可高效準確地獲取全譜分析結果。
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1.EDS與XPS的相同點:兩者均可以用于元素的定性和定量檢測。2.EDS與XPS的不同點:1)基本原理不一樣:簡單來說,XPS是用X射線打出電子,檢測的是電子;EDS則是用電子打出X射線,檢測的是X......
全譜分析所得到的信號比較粗糙,只是對元素進行粗略的掃描,確定元素有無以及大致位置。對于含量較低的元素而言,信噪比很差,不能得到非常精細的譜圖。通常,全譜分析只能得到表面組成信息,得不到準確的元素化學態......
全譜分析一般用來說明樣品中是否存在某種元素。比較極端的,對于某一化學成分完全未知的樣品,可以通過XPS全譜分析來確定樣品中含有哪些元素(H和He除外)。而更多情況下,人們采用已知成分的原料來合成樣品,......