你注意了嗎？生化分析儀試劑間污染

一、試劑間化學污染的來源

全自動生化分析儀發展迅速，具有多項目、多樣本的處理能力，檢測速度不斷的提高，但由于共用吸樣針、試劑針、攪拌棒以及比色杯，當生化儀長期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化儀內污垢的積聚、測試順序安排不當，且常規清洗不能有效消除交叉污染時，就會增加試劑間化學污染的可能性，引起測定結果不準確。

１.試劑針污染：目前大多數全自動生化分析儀采用雙試劑檢測樣本，，試劑Ｒ１、Ｒ２的吸取與吐出，一般分別只配有一套試劑針。當試劑針在清洗不完全，或黏附力增加時，殘留試劑可能會對下一相臨檢測結果造成影響。

２.攪拌棒污染：在試劑與樣本混合后，往往需要攪拌棒加以混勻，而攪拌綁若清洗不完全，或黏附力增加時，殘留試劑可能會對下一相臨檢測結果造成影響。

３.比色杯污染：生化分析儀的比色杯一般是循環使用的，每個比色杯檢測完畢后，進行清洗，然后繼續下一個檢測項目的檢測。當某個比色杯清洗不完全時，吸附在比色杯上的上一個項目的殘留試劑，可能會對在這個比色杯中進行的下一個項目的檢測結果造成影響。

以上３種可能的污染，以比色杯污染最為嚴重，因此比色杯最難以清洗干凈，且在實際工作中難以判斷該比色杯上一測試的項目；試劑針吸量較大，亦難以清洗干凈。

二、試劑間化學污染的類型

試劑間化學污染的原因很多，常見的類型主要有以下幾種：

１.試劑成分的直接污染：上一測定試劑中含有下一測定所需要測定的物質，直接干擾下一檢測的測定結果。如：AMY試劑中含有較高濃度的Ca2+ ；ALP（IFCC法）、CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）、CO2（PEPC法）、AMY（EPS法）、TG等試劑中含有Mg2+；GLU（氧化酶法）、TP、ACP試劑中含有較高濃度的K+；ChE、CHOL、GLU（GOD法）、UA（尿酸酶法）、LDH（IFCC法）、HBDH（DGKC法）等試劑中含有磷酸緩沖液；CHOL、TG、HDL-C試劑中含有膽酸鈉；AST（IFCC法）、ALT（IFCC法）、試劑中含喲高活性LDH；以上試劑的交叉污染就會分別對Ca2+、Mg2+、K+（紫外酶法）、P、TBA、LDH的測定結果造成干擾。

２.試劑成分參與反映：上一個試劑中含有的某種試劑成分與下一反應所要測定的底物有作用，因而干擾下一反應的測定結果。如：（1）鎂測定試劑的絡合劑亦能與鐵結合，影響鐵有鐵絡合劑的結合；（2）直接膽紅素（重氮法）試劑含EDTA，鎂試劑中含有EGTA，均能與Ca結合，從而Ca的測定；（3）以甘油作為酶保護劑的試劑，回對TG的測定帶來干擾；（4）鈣（MTB法）試劑對鉀有負干擾；（5）CHOL試劑中含有膽固醇酯酶，可水解膽固醇酯形成游離膽固醇，而引起對游離膽固醇測定的干擾。

３.反應進程相同：上一試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾，下一項目所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結果。如：（1）當上一個反應產物為H2O2時則對以Trinders反應產生顏色的測定結果引起干擾。如UA對CHOL結果的影響；CHOL對CREA（酶法）測定結果的影響；GLU（氧化酶法）對CREA測定結果的影響。（2）CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）試劑中含GLU成分，其分析方法的原理中GLU的已糖激酶（HK）反應過程，因此可能對GLU的測定帶來干擾。

４.影響反映條件：影響下一項目的反應條件如pH等，從而改變反應速率。如：（1）直接膽紅素（釩酸鹽氧化法）試劑中含有表面活性劑的酒石酸鹽緩沖液會影響ALT活性，對測定結果有負干擾。（2）CREA（苦味酸速率法）反應條件為堿性，果糖胺（動力學法）反應條件為酸性，受到污染后反應速率會減慢。（3）CREA（酶法）史試劑中含有抗壞血酸氧化酶，影響了氧化還原反應的進程，回對 TBA（酶循環法）測定結果有影響。

三、試劑間化學污染的判別

由于試劑中化學成分非常復雜，各種穩定劑、反應物質、緩沖體系共存，且各品種、各廠商的試劑內含物均不同，因此時機間的化學污染往往較難判別。日常工作中往往是儀器評估沒問題，而用戶使用時存有污染；質控品和Westgard法則不起作用，質控往往在控；污染具有偶然性，并不是每次都出現。這就導致了判別此類污染的困難性。

當按照日常的分析順序出現異常結果時，將出現異常結果的分析項目及其前一個項目單獨復檢又恢復正常，多是由于發生試劑間交叉污染所致。但由于試劑成分的復雜多樣性，儀器狀況的獨特性，可能發生的試劑間交叉污染的情況不盡相同。各個公司所提供的產品說明書長不能夠全面的反映試劑組成的情況，因此需要通過試驗才能發現試劑交叉污染可能帶來的干擾。一般可以用以下試驗來加以判別：

１.將某一試劑作為樣本進行全套項目測定，觀察各項生化結果的情況，進而確定發生試劑交叉污染時造成直接干擾的項目。

２.一份樣本分成兩份，一份加生理鹽水或其他適當的稀釋液，另一份加等量的某試劑，同時測定，觀察結果的變化，進而確定發生試劑交叉污染時造成直接干擾的項目。

３.試劑交叉污染試驗方法：（1）交叉污染初試：假設有3個項目 A，B，C，以一混合血清作為標本，按以下順序測試：A，A，A，A，A，B，A，C，A，B，B，B，B，B，C，B，C，C，C，C，C。得到的結果分別為：A1，A2，A3，A4，A5，BA-B，AB-A，CA-C，AC-A，B1，B2，B3，B4，B5，CB-C，BC-B，C1，C2，C3，C4，C5（AB-A：表示B項目對A項目污染時A項目的測定值，其余表示類同）。以A2-A5、B2-B5、C2-C5的4次測定平均值分別作為A、B、C項目無污染時的測定值。若（AB-A/A×100%）<95%或>105%則強烈支持B試劑對A有交叉污染。(2)疑似污染確認：若上述初試驗結果B對A有污染，則可進行以下試驗進行確認，測定順序為：B,A,A,A,結果為：B，A1，A2，A3。若（A1/A3×100%）<95%或>105%，則強烈支持B對A有交叉污染。A1→A3的結果可觀察受B污染的程度是否逐漸減輕。

四、消除試劑間化學污染的方法

１.要求檢驗人員對儀器工作流程、試劑組成、測定原理要了如指掌，對試劑交叉污染的各種可能性加以考慮，合理設計程序。更換試劑時應仔細研究說明書，發現和避免可能存在的試劑交叉污染。

２.當發現有交叉污染時，應對儀器進行保養，如更換比色杯、管道，用無水乙醇擦洗試劑針和攪拌棒，檢查清洗裝置及效果等。

３.合理安排檢測項目的順序，在有交叉污染的檢測項目中間插入一個或兩個非污染項目。最徹底的做法則是將被干擾項目置于干擾項目之前，以消除干擾發生的可能。由于各個感廠商試劑盒原理不同，內含成分不同，故無固定的測定順序格式，需要自己摸索。一般檢測順序有以下原則：（1）不受上一試劑的干擾；（2）不影響下一試劑測定；（3）不影響測試速度；（4）充分運用剩余試劑位開展新項目；（5）利用好儀器的功能。

４.當合理設置測試順序無法消除交叉污染時，可使用生化儀的試劑針、比色杯清晰程序，對試劑針、比色杯進行2次或多次清洗。用堿性清洗掖及酸性清洗掖沖洗試劑針可以有效地避免攜帶污染。

５.選用具有抗交叉污染的試劑盒：如在游離膽固醇試劑中添加膽固醇酯酶抑制劑，以減少膽固醇酯酶水解膽固醇酯而引起對游離膽固醇測定的污染。

實際工作中，用全自動生化分析儀進行連續的多個項目的測定，每個反應的詳細過程難以探知，特別是比色杯的交叉污染無明顯的特征，因此應理論分析結合實際應用摸索出一套符合本單位的方法

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