技術原理:
KingFisher系列產品是適于分離DNA/RNA、蛋白和細胞的全自動提取純化系統,專為解決客戶現在和未來的所有純化問題而設計。創新的產品基于ZL的KingFisher技術(ZL號US
6447729, US
6448092),通過特制的磁棒吸附、轉移和釋放磁珠,從而實現磁珠/樣品的轉移,避免了液體處理過程,提高了自動化程度。KingFisher技術的工作原理如下圖所示,樣品、溶液和磁珠置于微孔板或管中,磁棒表面套有專門的磁套用于保護磁棒避免與樣品/溶液/磁珠直接接觸。
kingfisher技術原理圖
磁珠的分類:
KingFisher技術所采用的磁珠粒徑在0.5-10μm之間,其內核是鐵氧體(Ferrite-based),表面覆蓋高分子惰性材料,如苯乙烯、瓊脂糖等。與經典的層析介質相比,磁珠的粒徑比常規的介質粒徑(40μm)小,因而具有更大的比表面積,而某些具有超順磁性(Superparamagnetic)的磁珠具有更好的懸浮性能和分散性。
根據不同的表面處理與標記,可將磁珠分成各種不同的應用類型:
TiO2磷酸化多肽富集磁珠
磁珠表面覆蓋有一層TiO2材料,可以選擇性的與磷酸化的氨基酸殘基:絲氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)、蘇氨酸(Thr)結合,而與酸性的氨基酸殘基的非特異性結合最小。與傳統的IMAC技術相比,其靈敏度提高了1000倍,富集后磷酸化蛋白的質譜檢出限達100
fmol。
谷胱甘肽(GSH)磁珠
該磁珠表面包被有瓊脂糖,并偶聯有谷胱甘肽,可以特異性的與谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)結合,因而可用于純化帶有GST標簽的重組蛋白。TALON?磁珠。TALON磁珠的原理是基于采用Co離子的固定化金屬離子親和技術(IMAC),可用于純化帶有組氨酸標簽(6xHis)的重組蛋白。
Protein A和Protein G磁珠
帶有Protein A或Protein G基團的磁珠,可廣泛應用于IgG的純化、免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等。
硅質膜磁珠
這是一類最早出現的產品,廣泛應用于DNA、RNA的純化。其原理類似于使用硅質膜的離心柱,磁珠在高鹽條件下與核酸結合,而在低鹽環境下被洗脫,可用于全血、組織、細菌、病毒、植物等的核酸純化。
反相RPC磁珠
類似于反向層析的原理,可用于多肽的分離純化。Jimenez等使用KingFisher96和Dynabead? RPC 18磁珠僅需20min就可以平行處理96個樣品,用于與疾病相關的血清中肽段表達譜的研究。
ChargeSwitch?磁珠
ChargeSwitch磁珠的原理類似于離子交換技術,磁珠在pH
< 6.5的緩沖液中帶正電,可與帶負電的核酸結合;在pH>
8.5的緩沖液中磁珠帶負電,使得之前吸附的核酸從磁珠上釋放。ChargeSwitch磁珠可在KingFisher平臺上完美使用。
技術應用:
基因組學
KingFisher磁珠提取純化平臺,非常適合于基因組學的研究。無論提取樣本的來源是微生物、動物、植物或是病毒,KingFisher都可以快速的純化出足夠數量的DNA或RNA。高質量的結果可以滿足下游應用(如熒光定量PCR)的需要。
畜牧獸醫、CDC的應用
使用專門的KingFisher試劑盒,可高效、高靈敏度地提取禽流感病毒(Avian
influenza virus)、新城疫病毒(Newcastledisease virus)、牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral
diarrheavirus)、立克次體(Coxiella burnetii)等。KingFisher結合Ambion的MagMAX-96
AI/ND病毒RNA提取試劑盒,應用于禽流感病毒的檢測,是獲得美國農業部(USDA)認可的高通量方法。提取得到的RNA可以通過ABI公司的Infleuenza
A/H5 Kit檢測是否含有禽流感病毒,并進一步確認是否是備受關注的H5亞型。