首先行穿刺區域常規消毒后鋪無菌巾，并行穿刺局部浸潤麻醉。（注意麻醉時，不要刺傷肺組織）。肺穿刺活檢可分為細針穿刺細胞學檢查及切割針穿刺組織學檢查。
1.細針穿刺細胞學檢查 先將穿刺針刺入皮膚后沿術前影像學所定的穿刺部位、方向及深度，緩慢進針（能在超聲引導下穿刺最為理想），直至進入預定穿刺目標后，拔去針芯，接上20毫升注射器，在保持負壓狀態下使針尖在病灶內作小幅度上、下提插2～3次，然后去掉負壓并拔針。迅速將抽吸物推置于玻片上，涂片后即用95%酒精固定送細胞室檢查。
2.多孔倒鉤針穿刺組織學檢查 首先用手術刀在穿刺點表面皮膚上作一小口，以利進針。將穿刺針從肋間沿原定的穿刺方向及深度直插到腫瘤底部后，抽出針芯并將針在腫瘤內往返提插數次，使更多的組織陷入針孔（操作中應保持垂直進針與出針，不得擺動），然后拔針。用針芯推出瘤組織于消毒的濾紙片上，固定，送檢。
3.槽式針穿刺組織學檢查 用帶針芯的槽式穿刺針活檢時，它不同于多孔倒鉤針的方法是當穿刺進入腫瘤包膜后，抽出針芯繼續前進，腫瘤組織可沿針槽嵌入針腔內，此時應旋轉180°～360°割斷瘤組織，并迅速出針。用針芯推出組織塊于消毒濾紙片上，固定、送檢。