動物組織中金霉素殘留測定的高效液相色譜柱后衍生反應

動物組織中金霉素殘留測定的高效液相色譜柱后衍生反應研究

摘　要:建立了動物組織中金霉素殘留測定的高效液相色譜柱后衍生法,研究了鎂離子和草酸體系對金霉素熒光強度的影響。結果表明,鎂離子濃度和草酸濃度為1∶1. 2 時,金霉素的熒光強度最強。動物組織樣品以5 %高氯酸提取,正己烷脫脂,C18 凈化, Hyper sil ODS C18 (250 ×4. 6 mm ,5 μm) 分離,流動相為甲醇∶0. 05 mol/ L 草酸= 80∶20(V / V ) ,流速為0. 7 mL/ min ,柱后0. 05 mol/ L 乙酸鎂衍生,流速為0. 1 mL/ min , 紫外檢測器和熒光檢測器同時測定,提高了金霉素殘留定量靈敏度。紫外檢測波長365nm , 熒光檢測波長λex = 360 nm ,λem = 520 nm。

    金霉素作為獸藥已有50 多年的歷史,目前仍然是常用的畜禽抗生素類藥物。金霉素價格便宜,療效好,但長期大量使用帶來的殘留問題時有發生。Okerman 等[ 1 ] 報道,有1. 2 %的雞肉和2. 7 %的豬肉中檢出金霉素殘留。自上世紀80 年代科學家發現金霉素對格蘭氏菌有高抑制作用以來,各國開始限制金霉素作為獸藥使用,歐盟規定家禽和豬肉中金霉素最大殘留限量(MRL) 為0. 1 mg/ kg ,我國規定豬肉中金霉素的MRL 值為0. 1 mg/ kg。
    金霉素的測定方法主要有酶聯免疫分析( EL ISA) 法[1 ,2 ] 、高效液相色譜( HPLC) 法[3 - 6 ] 、液相色譜-質譜( HPLC2MS) 法[7 ,8 ] 、熒光光譜法[9 ,10 ] 和毛細管電泳法[11 ] 等。Tjornelund 等[12 ] 探討了四環素族在金屬離子絡合作用下,毛細管電泳分離的影響因素。文獻[13 - 15 ] 報道Ca2 + 、Al3 + 、Zr4 + 能與四環素絡合并產生熒光。在四環素族抗生素的高效液相色譜法檢測時,金霉素的出峰時間晚,峰拖尾嚴重,靈敏度較差。基于HPLC 柱后衍生測定金霉素殘留的方法尚未見報道。
    本文建立了動物組織中金霉素與殘留測定的HPLC 柱后衍生法,研究了鎂離子和草酸體系對金霉素熒光強度的影響。由于熒光檢測器只對熒光物質有響應,且靈敏度高,因此,通過HPLC 柱后衍生熒光法測定金霉素殘留可大大提高檢測靈敏度。