反相高效液相色譜的固定相是非極性溶劑,常見的固定相是十八烷基鍵合硅膠,流動相是極性溶劑,常見的流動相是甲醇,乙腈。
反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系,它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相反。