固相萃取技術在體內藥物分析中的應用

固相萃取技術廣泛應用在體內藥物分析中。由此充分學習固相萃取基本原理、填料種類和自動化操作等，可以更好的幫助我們進行藥物分析。

近年來,由于高效液相色譜,特別是反相高效液相色譜的成功應用,人們利用色譜理論,采用裝有不同填料的小柱進行樣本制備的固相萃取(亦稱液2固萃取)技術( SPE)日益受到重視。由此充分學習固相萃取基本原理、填料種類和自動化操作等，可以更好的幫助我們進行藥物分析。

SPE基本原理

將不同的填料作為固定相裝入微型小柱,當含有藥物的生物樣品溶液通過時,由于受到“吸附”或“分配”或“離子交換”或其它親和力作用,藥物或雜質被保留在固定相上,用適當的溶劑洗除雜質,再用適當溶劑洗脫藥物。

洗脫方式有兩種:一種是藥物比雜質與固定相之間的親和力更強,因而被保留,然后用一種對藥物親和力更強的溶劑洗脫;

另一種是雜質較藥物與固定相之間親和力更強,則藥物被直接洗脫。通常使用的是前一種模式。

SPE填料種類及萃取機制

SPE技術的核心是填料,填料種類繁多,可分成親脂型、親水型和離子交換型3類。根據所采用固相萃取劑的種類,可將固相萃取法分為3類:正相、反相和離子交換固相萃取。在生物藥物分析中,常用的是反相和離子交換固相萃取。固相萃取的作用機制主要包括非極性作用(色散作用) 、極性作用(氫鍵作用、偶極矩和誘導偶極作用等) 、離子作用和共價作用等。目前隨著新固相萃取劑的應用,由于可以綜合應用多種作用機制,從而提高了各種固相萃取方法的應用范圍。

SPE技術的進展

SPE技術固有的優勢使其在生物樣本分析中有著越來越廣泛的應用,關于其新型固定相萃取劑和自動化操作設備的研究與應用方面有了一定的新進展。

1.新型固相萃取劑

擴大萃取劑的適用范圍,即提高固相萃取的通用性。因此,將極性、非極性基團、離子(陰、陽)交換基團或高分。

固相萃取的填料更具有選擇性。苯基硼酸( PBA)鍵合相硅膠被用于選擇性地萃取血漿中的一系列β2拮抗劑。其作用機理在于藥物與填料以共價鍵結合,較為專屬地保留該類含醇羥基的藥物。

2.SPE自動化操作

眾所周知,體內藥物分析中的樣品量相當大,這就決定了如果不設法實現自動化,大量的重復操作不可避免的由人工完成,這個過程是繁雜、費時而又耗費人力的。因此,即使是SPE這種單個操作相對省時的前處理技術,大力開發其自動化技術,也是十分必要的。

早期的自動化固相萃取系統是逐個連續進樣的,當一個樣品完成洗脫過程后,另一個樣品才可以進樣,耗時較長。進入上世紀90年代以后,自動化的平行操作固相系統得到了推廣。使用這樣的裝置,固相萃取的速度遠遠超過了人工操作。自動化程度高、可與HPLC或LC2MS聯用,從而實現樣品在線預處理的特點使得固相萃取技術在組合化學、藥物篩選等高通量領域得以廣泛應用。

SPE在體內藥物分析中的應用

隨著技術的日益完善,固相萃取以其高效、萃取率高、作簡便等優點在體內藥物分析中應用不斷增多,豐富了生物樣品預處理的方法。SPE與液一液萃取相比,操作簡單,耗時短,節省試劑,無污染,因此,很多分析工作者嘗試采用這種方法,獲得了良好的效果。

(1)測定人血漿中地賽米松濃度時,使用Oasis HLB C18固相萃取小柱預處理血漿樣品,簡便、快速,只需要經過簡單的固相萃取,每一樣品的分析時間只需9分鐘,并且節省試劑,回收率高,符合臨床上對人血漿中的地賽米松的濃度測定要求。

(2)血漿中皮質醇研究時,沒有采用國內普遍應用的二氯甲烷提取標本,放射免疫法測定含量的方法,由于工作人員接觸有毒試劑,同位素也會污染環境,而且只能單一測一種物質,改用固相萃取技術,應用高效液相色譜方法可同時測定血漿中的可的松和皮質醇兩種物質,分離效果令人滿意。進行生物樣本預處理時引入雜質少、回收率高是SPE的優點之一。

(3)測定血漿中的抗癲癇藥物時,采取了固相萃取的預處理方法,較之傳統的液一液萃取方法簡單,用時少:比較同一血漿經兩種方法提取后的含量測定色譜圖,可見SPE的樣品雜質明顯減少,因此可減輕對色譜柱的污染,延長其使用壽命。

SPE技術的出現使生物樣本處理過程大為簡化,自動化SPE的使用真正實現了生物樣本的在線分析,以其高效、高選擇性、高度自動化的特點廣泛用于體內藥物分析中各種生樣品的分離和純化。但是,應該看到的是,固相萃取技術在使萃取劑更具有選擇性和通用性方面仍然存在一定差距,自動化的預處理技術的應用還不夠廣泛,應該進一步研究。隨著這項技術的逐漸成熟,在體內藥物分析樣本處理中所處的地位會越來越要。