一、外周血細胞樣本制備方法的選擇
一般檢測細胞大分子成分---DNA、RNA、蛋白質的含量、基因表達蛋白等，多采用淋巴細胞分離液分離法制備單個核細胞懸液。這樣就可以從血液中分離出單個核細胞---淋巴細胞、單核細胞、幼稚血細胞和腫瘤細胞等。外周血免疫細胞、細胞生長因子、某些基因蛋白、細胞表面標志檢測可來用溶紅細胞法。
二、單個核細胞樣品制備程序
1. 取外周血 2 ml，肝素抗凝，用生理鹽水將血稀釋成 4 ml，混勻。
2. 將稀釋后血液沿試管壁徐徐加入 4 ml 淋巴細胞分離液 Ficoll 到液面之上，勿用力過大，以免造成血液與分離液混合，保持清晰的分層狀態。
3. 離心 2000 r/min，30 min，室溫 18~20℃，離心后可見試管內的血液清楚地分為 4 層，上層為血漿層，中層為分離液層（單個核細胞所處于血漿層和分離液層中間），底層為紅細胞層，紅細胞層上為粒細胞層。
4. 用吸管將上層與中層之間的單個核細胞層吸出收集到另 1 試管中，用生理鹽水洗 2 遍，每次均以 1500 r/min，離心 10 min，棄上清后即得到高純度的單個核細胞懸液。
5. 用適當的固定液固定或置低溫冰箱保存待用。 展 | 