近二十多年來,國際上研制成功了僅做一次試驗就能檢測多項反應,或幾十項反應,使微生物能很快地、簡易地被鑒定,這種技術稱為多項微量簡易鑒測技術,或簡易診檢技術,或數碼分類鑒定法。
多項微量簡易鑒測技術已廣泛用于動植物檢疫、食品衛生、環境保護、藥品檢査、發酵控制、生態研究等方面,尤其是臨床檢驗中深受歡迎,迅猛發展。國際上此技術的產品,或稱系統,種類繁多,國內有河南開封醫學生物研究所的腸桿菌科細菌鑒定卡 E-15;上海市衛生防疫站的發酵性革蘭氏陰性桿菌鑒定系統 SWF-A;中國入民解放軍一八一醫院的厭氧菌快速生化鑒定系列 ARB-ID;深圳華士達生物科技有限公司的腸桿菌科的細菌生化鑒定卡 ENT 等。國外的產品已標準化、系統化和商品化,主要有法國生物一梅里埃集團的 API/ATB;瑞士羅氏公司的 Micro-ID,Entemtube,Minitelk,美國的 Biolog 全自動和手動細菌鑒定系統;日本的水中大腸桿菌快速鑒定板等,其中 API/ATB 包括眾多的鑒定系統,共計有 750 種反應,可鑒定幾乎所有的細菌+多項微量簡易鑒測技術優點突出,不僅能快速,敏感、準確、重復性好地鑒檢微生物,而且簡易,節省入力,物力、時間和空間,缺點是各系統差異較大,有的價格貴,有的個別反應不準,難判定,但毫無疑問,它是微生物學技術方法向快速、簡易和自動化發展的重要方向之一。
| 實驗方法原理 | API 20E 系統是 API/ATB 中最早和最重要的產品,也是國際上應用最多的系統,本實驗用它檢驗細菌。該系統的鑒定卡是一塊有 20 個分隔室的塑料條,分隔室由相連通的小管和小環組成,各小管中含不同的脫水培養基、試劑,或底物等,每一分隔室可進行一種生化反應,個別的分隔室可進行兩種反應,主要用來鑒定腸桿菌科細菌,如圖 1 所示。  圖 1 API 20E 鑒定卡
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| 實驗材料 | 待檢驗的腸桿菌科的分純的菌株 |
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| 試劑、試劑盒 | 無菌水 |
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| 儀器、耗材 | API 20E 系統液體石蠟滅菌毛細滴管 |
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| 實驗步驟 |
1. 將待檢驗的單個或多個菌落用無菌水配制成 1.5 億或大于 1.5 億的菌憊液,混合均勻。
2. 將 API 20E 鑒定卡的密封膜拆除,在卡上標明檢驗菌號、日期和試檢者。
3. 用無菌毛細管吸配制好的菌液,沿分隔室的小管內壁稍微傾斜地緩緩加入小管中,裝滿各個小管,而對鑒定卡上的試驗名稱加有方框線條的小杯,則還要加滿菌液,對試驗名稱下有一條橫線的小杯則要加滿液體石蠟。
加液時避免形成氣泡,如果形成了氣泡,則輕輕搖動除去,切勿用吸有菌液的毛細管除去氣泡。4. 將接種的鑒定卡放入裝有少量水的塑料盒或淺瓷盤中(防反應液蒸發),置 37℃ 孵育。
5. 孵育 18~24 h 后,在需要添加試劑的小杯中加入指定的試劑,如 IND 反應加入 IND 試劑,V.P. 反應加入 V.P. 試劑。觀察鑒定卡上各項反應的變色情況,根據反應判定表(表1)判定各項反應是陽性或陰性反應。
6. 按鑒定卡上反應項目的順序,每三個反應項目編為一組,共編為七組,每組中每個反應項目定為一個數值,依次是 1、2、4,各組中反應陽性者記「+」,則寫下其所定的數值,反應陰性者記「—」,則寫為 0,每組中的數值相加,便是該組的編碼數,這樣便形成了 7 位數字的編碼,見表 2 舉例說明。
7. 用 7 位數字的編碼査檢索表,或輸入電腦檢索。則能將檢驗的細菌鑒定是什么菌種。 展開 |
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