在時空分辨單細胞測序技術的臨床應用中,以下是一些樣本處理的最佳實踐方法:
樣本采集的及時性
盡快采集樣本,以減少細胞內基因表達和分子狀態的變化。
低溫保存
采集后迅速置于低溫環境(如液氮或 -80°C 冰箱)中,抑制酶活性和分子降解。
避免機械損傷
操作輕柔,減少對細胞和組織的物理損傷,保持其空間結構完整性。
無菌操作
嚴格遵循無菌原則,防止樣本污染,影響后續分析。
固定劑的選擇
根據樣本類型和研究目的,選擇合適的固定劑,如多聚甲醛等,既能保持細胞形態和分子結構,又不影響后續測序反應。
組織解離
采用溫和有效的解離方法,將組織分解為單細胞懸液,同時盡量減少對細胞表面標志物和基因表達的影響。
細胞過濾和分選
使用合適孔徑的濾網過濾細胞,去除細胞碎片和團塊,并通過熒光激活細胞分選等技術,獲取特定類型的細胞。
質量控制
在處理過程中,定期檢測樣本的細胞活力、RNA 完整性等指標,確保樣本質量符合測序要求。
標準化操作流程
建立詳細、標準化的樣本處理操作流程,并對操作人員進行嚴格培訓,以保證不同樣本處理的一致性和可靠性。
記錄詳細信息
記錄樣本采集的時間、部位、患者信息以及處理過程中的所有操作和條件,便于后續結果的分析和解讀。
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