木瓜蛋白酶的剪切肽鍵的機制包括:在His-159作用下Cys-25去質子化,而Asn-158能夠幫助His-159的咪唑環的擺放,使得去質子化可以發生;然后Cys-25親核攻擊肽主鏈上的羰基碳,并與之共價連接形成酰基-酶中間體;接著酶與一個水分子作用,發生去酰基化,并釋放肽鏈的羰基末端。