使用高效液相色譜儀時,監視器的基線不平的原因包括:
1、未平衡,
2、梯度 ,
3、柱內滯留雜質出峰
解決辦法:
A、峰拖尾 原因 解決方法 1、篩板阻塞 1、a、反沖色譜柱 b、更換進口篩板 c、更換色譜柱 2、色譜柱塌陷 2、填充色譜柱 3、干擾峰 3、a、使用更長的色譜柱 b、改變流動相或更換色譜柱 4、流動相PH選擇錯誤 4、調整PH值。對于堿性化合物,低PH值更有利于得到對稱峰 5、樣品與填料表面的溶化點發生反應圖 5、a、加入離子對試劑或堿性揮發性修飾劑 b、更改色譜柱 B、峰前延 原因 解決方法 1、柱溫低 1、升高柱溫 2、樣品溶劑選擇不恰當 2、使用流動相作為樣品溶劑 3、樣品過載 3、降低樣品含量 4、色譜柱損壞 4、見A1、A2 C、峰分叉 原因 解決方法 1、保護柱或分析柱污染圖 1、取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強保留物質污染,運用適當的再生措施。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。 2、樣品溶劑不溶于流動相 2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。 D、峰變形 原因 解決方法 1、樣品過載 1、減少樣品載量 E、早出的峰變形 原因 解決方法 1、樣品溶劑選擇不恰當 1、a、減少進樣體積 b、運用低極性樣品溶劑 F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 原因 解決方法 1、柱外效應 1、a、調整系統連接(使用更短、內徑更小的管路)b、使用小體積的流通池。 G、K’增加時,脫尾更嚴重 原因 解決方法 1、二級保留效應,反相模式 1、a、加入三乙胺(或堿性樣品)b、加入乙酸(或酸性樣品)c、加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品)d、更換一支柱子 2、二級保留效應,正相模式 2、a、加入三乙胺(或堿性樣品)b、加入乙酸(或酸性樣品)c、加入水(或多官能團化合物)d、試用另一種方法 3、二級保留效應,離子對 3、加入三乙胺(或堿性樣品) H、酸性或堿性化合物的峰拖尾 原因 解決方法 1、緩沖不合適 1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液 I、額外的峰 原因 解決方法 1、樣品中有其他組份 1、正常 2、前一次進樣的洗脫峰 2、a、增加運行時間或梯度斜率b、提高流速 3、空位或鬼峰 3、a、檢查流動相是否純凈b、使用流動相作為樣品溶劑c、減少進樣體積 J、保留時間波動 原因 解決方法 1、溫控不當 1、調好柱溫 2、流動相組分變化 2、防止變化(蒸發、反應等) 3、色譜柱沒有平衡 3、在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱 K、保留時間不斷變化 原因 解決方法 1、流速變化 1、重新設定流速 2、泵中有氣泡 2、從泵中除去氣泡 3、流動相選擇不恰當 3、a、更換合適的流動相b、選擇合適的混合流動相
色譜,2021,39(1):10-14DOI:10.3724/SP.J.1123.2020.07042微型述評液相色譜梯度洗脫中的譜帶壓縮效應郝衛強*,劉麗娟,沈巧銀郝衛強《色譜》青年編委個人簡介博士......
高效液相色譜儀進行梯度洗脫時,選定溶劑A、B之后,設定梯度速度和梯度時間,確定梯度曲線形狀,要以最經濟的梯度洗脫程序,實現樣品的最佳化分離。影響梯度洗脫的因素有:1、溶劑的純度要高,否則會使梯度洗脫的......
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2010年11月6日下午,第二十九期質譜沙龍活動在北京大學人民醫院(北京大學第二臨床醫院)舉行。來自解放軍第二炮兵總醫院、北京大學人民醫院、ABSCIEX公司、天津博納艾杰爾科技有限公司、北京艾米諾醫......
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1、何為空白梯度洗脫梯度洗脫由于是兩種流動相隨時間變化,即使在優秀的分析匠、在性能卓越的色譜儀都不可能出現非常好的基線,這就要求做空白梯度洗脫。啥叫空白?不用我告訴你吧,而取巧的辦法是進一針流動相,看......
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