植物組織制備基因組DNA實驗

植物組織

抽提緩沖液 十二烷基肌氨酸鈉 TE 異丙醇 溴化乙錠 氯化銫

離心機

1.  收取10~50 g 新鮮的植物組織。

2.  植物組織用冷的無菌水洗滌、吸干，放人液氮中凍結，用研缽和研杵研成細粉。

3.  將凍結的細粉放入250 ml 的離心瓶中，立即加入抽提緩沖液約每克植物5~10 ml，輕輕攪拌混勻。

4.  加入十二烷基肌氨酸鈉使終濃度達1%，于溫育1~2 h。

5.  用JA-14轉子4℃，5 500 g 離心10min 保留上清，必要時重復此歩驟以除去殘渣。

6.  加人0.6體積異丙醇，混合，如果看不見沉淀，于-20℃放置30 min，用JA-14轉子4℃，7 500 g 離心15 min，棄上清。

7.  沉淀用9 ml TE緩沖液重懸，加入9.7 g 固體氯化銫，混勻，冰上放置30 min，用JA-14轉子，7 500 g 離心10 min，保留上清。

8.  加入0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙錠，冰上放置30 min，4℃ 7500 g  離心10min.

9.  將上清轉入兩個5 ml 的快封超離心管中，并封口。

10.  用VTi80轉子20℃ 525 000 g 離心4 h，或20℃，300 000 g 離心過夜，用15號針頭和注射器收集帶。

11.  用氯化艷飽和的異丙醇重復抽提DNA以除去溴化乙錠。

12.  加入2體積水和6體積100%乙醇，混勻，-20℃放置1 h，用JA-20或JA-21轉子4℃，7500 g 離心10 min。

13.  沉淀用TE緩沖液重懸，加入1/10體積的3 mol/l 乙酸鈉和2體積的100%乙酵重懸，重復離心。

14.  沉淀晾干后用TE緩沖液重懸。