畢赤酵母高效轉化實驗方案
1.收集菌體
取1mlGS115過夜培養物(OD約6-10) 分裝到1.5ml EP管中，4℃、10000g 離心1min，棄上清，沉淀用無菌水(4℃)洗滌，同樣條件下離心，棄上清。
2.菌體處理
加入1ml處理液，室溫下放置20min。
處理液：
10mM LiAc
10mM DTT
0.6M sorbitol
10mM TrisHCl(pH7.5)
3.離心，棄上清，加入1ml 1M sorbitol ，離心，棄上清，
4.用1M sorbitol洗滌二次，到最終體積約為80μl.（菌體太多可適當棄去部分）
5.加入10μl.經過BglⅡ酶切處理的工程質粒，混勻后轉入 電擊杯中，冰浴5min.
6.電轉. 1.5kv，25μF，200Ω條件下進行電轉。
7.電擊后立刻加入1mL 1M sorbitol，吸出后于30℃培養2h。
8.取一定量涂平板(YPDS + Zeocin，涂布的量分別為100、200微升，剩余的經離心處理后全部涂在一個平板上)
有一點要注意的是處理液中的DTT是在使用前加入，其它配好后于4度保存，DTT單獨于-20度保存，可配成100倍的貯備液。