牛乳中黃曲霉毒素M1的測定

1.奶產品中黃曲霉毒素M1的限量我國GB 2761-2011 《食品安全國家標準 食品中真菌毒素的限量》中明確規定牛乳中黃曲霉毒素M1的限量為0.5μg/kg，與美國、日本一致，歐盟成員國以及與歐盟有貿易部分國家相對嚴格，為0.05μg/kg，而歐盟對嬰幼兒配方食品，包括嬰幼兒配方牛奶則限量0.025μg/kg。

2.黃曲霉毒素M1的檢測方法 目前現有黃曲霉毒素M1檢測方法有薄層色譜法、酶聯免疫法、熒光光度法、液相色譜法、液質聯用法等。我國現行有效的標準有GB 5413.37-2010《食品安全國家標準 乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的測定》、GB 5009.24-2010《食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素M1和B1的測定》、GB/T 23212-2008《牛奶和奶粉中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的測定 液相色譜-熒光檢測法》、SN/T 1664-2005 《牛奶和奶粉中黃曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的測定》等。牛乳中黃曲霉毒素M1的測定主要推薦使用GB 5413.37-2010中的第一法(液質聯用免疫親和層析凈化法)和第二法(高效液相色譜免疫親和層析凈化法)。這兩種方法都適用，但從日常檢測經驗來看，液相法定量方面優于液質法，且操作相對簡單、儀器普及率高，牛乳中黃曲霉毒素M1的測定推薦使用第二法。

3.液相色譜免疫親和柱凈化法1)樣品前處理

A準確稱樣:牛乳取50 mL(g)以上,奶粉稱取10 g左右，取樣量一定按照標準要求操作。

B復原：奶粉需用50℃溫水50 mL復溶，完全溶解，不能有結塊，冷卻至室溫后定容至100 mL。

C離心去脂：樣液在4 ℃下以10000轉/min轉速下冷凍離心15 min，完全去除脂肪，吸取清液，操作過程中不得混入脂肪。

D凈化、濃縮：應注意冷藏保存的免疫親和柱需恢復至室溫，并檢查柱效，柱效應大于80 %，且上樣過程中免疫親和柱不能流干;流速一般控制在2-3mL/min;水洗后需抽干，用3mL甲醇洗脫收集，氮氣吹至近干，用10%乙腈水溶液定容至1mL。

2)色譜條件

色譜柱： C18 4.6×150mm,3.5-5Micron 。

流動相：乙腈-水(25：75)

流速： 0.8ml/min 。

進樣量：30.0 uL。

柱溫：25℃。

檢測器：熒光檢測器;

激發波長365nm，發射波長435nm;

圖1黃曲霉毒素M1標樣圖譜

圖2 牛乳樣品中黃曲霉毒素M1圖譜

3)能力驗證中注意事項

樣品貯存：拿到能力驗證考試樣后，如果不馬上做應放入冰箱4°C保存;

標準物質：應使用有證標準物質，biopure(ROMER)、色譜科(SUPELCO)等有證標準溶液都可以，貯備液用乙腈配置，工作液標樣直接用流動相配制;

洗脫步驟：免疫親和柱的使用按照各廠家說明書操作。洗脫液一般使用色譜純的試劑。

樣品質控：1)添加回收;2)實物標樣;

取樣：離心后取清液時，注意不要將離心后的脂肪層混入。

濃縮：注意氮吹的流量和溫度，氮氣流量不可太大。

陽性樣本：日常檢測中留意保留陽性樣本，作為質控參考。