蛋白酶的種類繁多,不同的蛋白酶的性質和催化反應條件各不相同,無法規定一個統一的測定方法,目前使用最多的有福林—酚法、紫外分光光度法、甲醛滴定法、DHT-酪蛋白法。
1、福林酚法
蛋白酶催化蛋白質水解成氨基酸,其中含酚基的氨基酸（色氨酸、酪氨酸）與福林試劑反應,生成藍色復合物,藍色深淺與含酚基氨基酸的多少成正比,以此來測定酶的活力。
2、甲醛滴定法
蛋白酶催化蛋白質水解成氨基酸,再用甲醛固定氨基酸的氨基,用0.1mol/LNaOH溶液滴定生成的氨基酸,從而測定其酶活。
3、DHT-酪蛋白法
用5-氨基四唑重氮鹽將酪氨酸中部分組氨酸和酪氨酸重氮化,得到黃色的重氮5-氨基四唑酪蛋白（DHT-酪蛋白）。以DHT-酪蛋白為底物,在蛋白酶作用下,水解生成DHT-肽,二價離子可與DHT-蛋白與DHT-肽形成穩定的可溶性紅色螯合物,而鋅離子可迅速沉淀DHT-酪蛋白,但不沉淀DHT-肽。選用合適濃度的鋅離子和鎳離子作為沉淀劑和顯色劑,利用比色法可測定蛋白酶活力。