用酶聯法檢測腫瘤病人紅細胞免疫功能及其臨床意義

【摘要】 介紹用酶聯法檢測紅細胞免疫粘附（red cell immune adherence RCIA）活性及紅細胞膜免疫復合物（ciculating immune comple CIC）水平的測定方法。并測定42例正常人和28例病癥患者。結果正常對照組RCIA活性為4.56±0.35ngAHC/10 RBC。實驗組為2.74±0.40，P＜0.001，對照組CIC水平為4.28±0.23ngAHG/10 RBC，實驗組為3.12±0.22，P＜0.001.本研究初步證實用酶聯法測定腫瘤患者紅細胞免疫功能，方法可靠，定量準確，適合臨床推廣應用。
【關鍵詞】  酶聯法；RCIA活性；RBC膜CIC

        自1981年美國學者Siegel等提出紅細胞不經具有呼吸功能，而且與白細胞一樣具有免疫功能1982年郭峰等用酵母菌花環法進行紅細胞免疫功能測定，并在臨床免疫上取得很大成效，完善了對紅細胞免疫功能的認識。但由于酵母菌花環法影響因素多，手工操作，要求熟練，僅為半定量。筆者根據曹東[3]用ELISA法檢查白血病患者紅細胞免疫功能的研究及Miyakawa[4]應用放射碘標記抗人IgG抗體法，檢測了正常人42例及腫瘤病人28例的RCIA活性及RBC膜CIC水平變化情況，現將檢測方法及結果報道如下。
        1材料與方法
        1.1  受檢對象:
        1.1.1 正常人42例，男24例，女18例，年齡24－45歲，均健康獻血員。
        1.1.2 腫瘤病人28例，其中肝癌7例，肺癌8例，膀胱癌1例，腸癌1例，淋巴瘤3例，宮頸癌4例，鼻咽癌3例，胃癌1例。年齡21－63歲。均為病檢確診的病例。
        1.2  材料:0.05M PH9.6碳酸鹽緩沖液的包被液。GVB++紅細胞洗滌液。0.02M Tris-Tween-20酶反應洗滌液。豚鼠混合血清。人IgG：采用Batch技術[5]提取。熱凝聚IgG根據林森報道的方法[6]。羊抗人IgG－HRP武蒲生物制品研究所提供，批號930401。
        1.3  方法:
        1.3.1  紅細胞結合物懸液的制備:抗凝血用pH7.4的GVB++緩沖液洗滌3次，然后調整紅細胞濃度為108∕ml細胞懸液，取稀釋2倍的新鮮豚鼠混合血清0.2ml及3.5μg∕100mlAHG0.2ml加紅細胞懸液0.2ml混勻置37℃水浴45分鐘，用GVB++液洗3次，最后用PBS-Twee20恢復為0.2ml。
        1.3.2  紅細胞酶聯免疫，以人IgG（20μg∕ml）200μl包被酶標反應板各孔，放4℃過夜，然后用1%BSA－PBS－0.05% Tween20洗滌3次，37℃溫育30分鐘，再加倍比稀釋AHG（35－0.068μg∕ml）作競爭抑制標準曲線，其他各孔加待檢查，每位兩孔。一孔加入未結合物懸液100μl，然后37℃溫育2小時后洗滌3次，加底物200μl置37℃30分鐘，再加終止液50μl，用DG322A型（南京產）酶標光度計按波長492nm讀取OD值，作競爭法標準曲線，求出待檢樣品RCIA活性含量及RBC膜CIC含量。