1.儀器裝置 包括電泳室及直流電源兩部分。 常用的水平式電泳室裝置如圖,包括兩個電泳槽 A和一個可以密封的玻璃(或相應材料)蓋B；兩側的電泳槽均用有機玻璃(或相應材料)板 C分成兩部分；外格裝有鉑電極(直徑0.5～0.8cm)D；里格為可放濾紙 E的有機玻璃電泳槽架F,此架可從槽中取出；兩側電泳槽A內的鉑電極 D經隔離導線穿過槽壁與外接電泳儀電源相連。 電源為具有穩壓器的直流電源,常壓電泳一般在 100～500V,高壓電泳一般在500～10 000V。
2. 操作法
(1) 電泳緩沖液
枸櫞酸鹽緩沖液(pH3.0) 取枸櫞酸 (C6H8O7·H2O)39.04g 與枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)4.12g,加水 4000ml,使溶解。
(2) 濾紙
取色譜濾紙置 1mol/L甲酸溶液中浸泡過夜,次日取出,用水漂洗**洗液的pH 值不低于4,置60℃烘箱烘干,備用。可按需要裁成長27cm、寬18cm的濾紙,或根據電泳室的大小裁剪,并在距長度方向一端 5～8cm處劃一起始線,每隔2.5～3cm 處做一記號備點樣用。
(3) 點樣 有濕點法和干點法。
濕點法是將裁好的濾紙全部浸入枸櫞酸鹽緩沖液(pH3.0)中,濕潤后,取出,用濾紙吸干多余的緩沖液,置電泳槽架上,使起始線靠近陰極端,將濾紙兩端浸入緩沖液中,然后用微量注射器精密點加供試品溶液,每點 10μl,共3點,并留 2個空白位置。
干點法是將供試品溶液點于濾紙上,吹干、再點,反復數次,直**點完規定量的供試品溶液,然后用噴霧器將濾紙噴濕,點樣處**后噴濕,本法適用于稀的供試品溶液。
(4) 電泳
于電泳槽中加入適量電泳緩沖液,浸沒鉑電極,接通電泳儀穩壓電源擋,調整電壓梯度為 18～20V/cm,電泳約1小時45分鐘,取出,立即吹干,置紫外光燈(254nm)下檢視,用鉛筆劃出紫色斑點的位置。
(5) 含量測定
剪下供試品斑點和與斑點位置面積相近的空白濾紙,剪成細條,分別置試管中,各精密加入0.01mol/L鹽酸溶液5ml,搖勻,放置1小時,用3號垂熔玻璃漏斗濾過,也可用自然沉降或離心法傾取上清液,按各藥品項下的規定測定吸收度,并按吸收系數計算含量。