電泳出現拖尾現象,英文成為smear,就是彌散.其原因,主要從以下兩個方面考慮:
1、PCR產物自身原因:
往往由于酶量過多或酶的質量差,dNTP濃度過高,Mg2+濃度過高,退火溫度過低,循環次數過多,而造成PCR的非特異性產物 過多.
對策:①減少Taq酶的量,或調換另一來源的酶.②減少dNTP的濃度.③適當降低Mg2+濃度.④增加模板量,減少引物的用量 ,減少循環次數,提高退火溫度.
2、電泳體系的問題:
(1)電泳緩沖液TAE或者TBE的污染,建議更換緩沖液.(2)上樣時樣品漂了,建議增加上樣緩沖液的用量,以及小心加樣.(3)電壓太高.(4)適當把你的膠的濃度加大.(根據你的片斷大小而定)(5)觀察你的marker是否也存在拖尾現象,作為對照.