白細胞過濾對新鮮冰凍血漿凝血因子及血漿蛋白的影響

作者：楊江存1 于青 1 李芒會 2  董選玲 2 宋耀軍 1 任健康 2
（1.陜西省人民醫院輸血科，2檢驗科，西安710068）

應用白細胞過濾器制備的少白細胞血液成分在預防發熱性非溶血性輸血反應（NHFR），HLA同種免疫反應及各種相關疾病的感染等方面已取得一定效果。有效白細胞濾除前后對全血及紅細胞懸液性能、細胞形態及細胞免疫方面的影響研究已有報道，但對血漿制品濾除前后血漿蛋白及凝血因子的影響報道很少。由于血液凝血因子在機體凝血機制方面起著相當重要的作用，以及冰凍血漿所含不穩定凝血因子易失活等特性，本文通過觀察白細胞過濾前后對血漿凝血因子和血漿蛋白的影響來證實白細胞過濾血漿的應用價值，現報道如下：
1 材料與方法
1.1實驗儀器 SYSMEX CA-1500全自動血凝分析儀；HITACHI 7170A全自動生化分析儀。
1.2試劑 試劑均為DADE BEHRING 公司生產。標準血清（Lot.No.502578）；PT試劑（Lot.No.505627B）； APTT試劑（Lot.No.527158）； Fib試劑（Lot.No.537511）；TT試劑（Lot.No 515465）；Coagulation Factors Ⅶ（Lot.No.500780）；FⅧ （Lot.No. 503872B）；FⅨ（Lot.No.500881B）；Dade Thrombin Reagent 試劑（Lot.No.500560B） 
1.3研究對象：20份新鮮冰凍血漿來自陜西省血液中心，ACB-B抗凝全血分離制備而成。
1.4取樣方法：隨機分批抽取新鮮冰凍血漿（FFP）20人份，37℃水浴融化，融化后立即在超凈工作室內按無菌技術要求抽取血漿2ml為過濾前組，隨后對血漿進行過濾，并從過濾后的血漿中同樣抽取2ml為濾除后組，對兩組進行血漿凝血因子和血漿蛋白的測定。
1.5 凝血因子測定方法：嚴格按照SYSMEX CA-1500全自動血凝分析儀操作說明和試劑要求，采用凝結光學檢測法原理，對不同的檢測項目利用不同稀釋度標準血漿凝結時間與相應的凝血因子活性率取對數后標繪于對數圖上，繪制成標準曲線，然后測定受檢者血漿凝結時間與相應因子活性率所獲數據按內插法帶入回歸方程，計算受檢者血漿中凝血因子活性水平。我們觀察的指標為：PT、APTT、Fib、FⅦ、FⅧ、FⅨ等。血漿蛋白測定在HITACHI 7170A全自動生化分析儀上進行。
1.6 血漿白細胞濾除方法：在超凈工作室按無菌要求對血漿進行白細胞過濾，操作按濾器說明并等同全血或懸液過濾方法。白細胞濾器采用北京博德桑特公司生產一次性白細胞過濾器。
1.7統計處理 采用成對資料T檢驗。
2 結果：新鮮冰凍血漿白細胞過濾前后血漿凝血因子及血漿蛋白的變化見附表：
新鮮冰凍血漿白細胞過濾前后血漿凝血因子及血漿蛋白的變化
PT(s) INR APTT(s) FIB(g/L) TT(s) 
濾前 13.32±0.64 1.109±0.05 35.26±22.63 2.204±0.57 16.45±1.64
濾后 13.86±0.64 1.155±0.05 83.31±27.63 2.333±0.57 18.29±1.64
t值 2.5730 2.8383 6.7138 1.2712 3.5452
p值 < 0.05 < 0.05 < 0.05 > 0.05 < 0.05
續表：新鮮冰凍血漿白細胞過濾前后血漿凝血因子及血漿蛋白的變化
FⅦ% FⅧ% FⅨ% TP(g/L) ALB(g/L)
濾前 94.08±5.74 148.32±47.44 103.3±13.85 58.96±3.67 38.09±1.72
濾后 97.9±5.74 123.02±42.18 86.32±14.47 59.46±2.50 38.90±2.10
t值 2.1029 3.570 2.885 0.652 0.587
p值 > 0.05 < 0.05 < 0.05 > 0.05 > 0.05

3 討論
3.1研究表明，血液中非治療性成分如白細胞是一種污染物，同種異體輸注將會產生許多不良輸血反應，如非溶血性發熱性輸血反應、HLA同種異體免疫反應、血小板輸注無效等，同時還可引起嗜白細胞病毒傳染病的感染[1、2、3]。白細胞濾除前后對全血及紅細胞懸液性能、細胞形態及細胞免疫方面的影響研究已有報道[4、5]。而對血漿制品濾除前后血漿蛋白及凝血因子的影響研究報道很少，且欒建風[6]等證明新鮮冰凍血漿中確實殘留有引起上述不良反應的殘留白細胞，且經凍存3個月后還有一定數量的白細胞存活，故其認為，新鮮冰凍血漿進行白細胞過濾是很有必要的。
3.2 新鮮冰凍血漿（Fresh Frozen Plasma, FFP）是自血液采集后6-8h之內經分離放入-50℃速凍成塊，然后在-30℃保存一年，其幾乎含有全部凝血因子，包括不穩定因子FⅤ和FⅧ[7] 。然而，不穩定凝血因子如FⅧ在體外半衰期為8-12h,其活性易失活，并由于在離體后FⅧ接觸異物表面，不同程度被激活，凝血酶和FⅩa也能在此繼續裂解FⅧa,使之滅活[8]。白細胞過濾器去除白細胞的機理通常為：①阻滯作用；②表面張力；③電荷密度。但濾材孔徑較凝血因子大的多，因此，血液過濾過程中阻滯作用可以不考慮；而濾材的表面張力和電荷密度在去除白細胞的同時，有可能對凝血因子和蛋白有一定的吸附作用。
3.3本資料凝血因子檢測指標有：PT試驗（凝血酶元時間），是用于快速、敏感檢測外源性凝血途徑（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅰ）凝血功能紊亂的篩選，INR是PT用國際標準化比值來表示；APTT試驗（活化部分凝血活酶時間），是用于內源性凝血因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ）活性異常的篩選；TT試驗（凝血酶時間），是用于快速評定止血和血栓形成的有效方法，可以定量監測功能性纖維蛋白原水平。
3.4本實驗結果表明，新鮮冰凍血漿白細胞過濾前后，PT、INR、APTT、TT、FⅧ%、FⅨ%都有明顯改變（P< 0.05）。白細胞過濾后，PT和APTT時間均延長，說明過濾對內外凝血因子活性都有影響，且從實驗結果可知對APTT和FⅧ%影響最大，也可能對FⅧ的吸附的影響而導致APTT時間的改變。李小平[9]等通過對全血過濾觀察對凝血因子的影響結果表明，APTT和PT也同樣延長，實驗結果一致。同時從我們的實驗結果可知，過濾前后血漿FIB、FⅦ%、TP和ALB沒有改變（P> 0.05）， 說明過濾對血漿蛋白含量無影響，對血漿纖維蛋白原凝血因子Ⅶ也無影響。文獻[9]對全血過濾前后凝血因子FⅨ%活性無影響，而我們的實驗結果有改變（P< 0.05）。我們的實驗結果與文獻[9]相比，過濾前后FⅧ%、FⅨ%活性明顯高于李小平[9]等的實驗數據，可能是庫存全血中不穩定凝血因子活性丟失有關。
實驗結果表明，新鮮冰凍血漿白細胞過濾可使部分凝血因子活性丟失，但其仍保持在正常治療水平之上，可以滿足臨床治療的需要。
參考資料
[1].胡麗華，曹奎杰，樂道利，等.白細胞過濾器的臨床應用.臨床血液學雜志，2000，13（6）：267-268。
[2].Dzik,W.H. Anderson,J.K. O’neill,E.M. et al. A prospective, randomized clinical trial of universal WBC reduction. Transfusion,2002, 42(9):1114-1122
[3].楊江存，袁育康，劉景田，等.紫外線照射庫血后不同儲存時期雪細胞免疫功能和細胞因子的變化.中國醫學物理雜志，2001，18（4）:246-248
[4].李卉，劉景漢，祁廣宏，等.去白細胞紅細胞制備的質量控制.中國醫師雜志，2002，15（1）：58-59
[5].何靜，陳方祥，劉建忠，等.去白細胞前后庫存SAGM紅細胞C3b受體功能的測定. 第三軍醫大學學報，2003，25（4）:322-323
[6].欒建風，嚴京梅，雷千紅，等.血漿中殘余白細胞的潛在免疫作用.臨床檢驗雜志，2003，21（2）：71-74.
[7]中華人民共和國衛生部文件衛醫發[2000]184號.<<臨床輸血技術規范>>.
[8]李靜旗，張麗，宮本蘭.冷鏈對新鮮冰凍血漿FⅧ活性的影響[J]。臨床輸血與檢驗,2003,5(3):192-193
[9] 李小平，馮永生，段景斌，等.白細胞過濾器對血液凝血因子的影響.中國輸血雜志，2003，16（6）：388