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  • 發布時間:2019-07-29 20:08 原文鏈接: 直接從PCR產物回收純化DNA

    1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管,再加入30~300μl PCR反應物,Vortex混合;
    2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次,每次間隔1分鐘;
    3)將取出拉桿的注射器筒(3ml)裝在純化柱上,加入上述DNA與樹脂混合液,然后裝上拉桿,慢慢將混合液推進純化柱內;
    4)卸下注射器筒,拔出拉桿,再將注射器筒裝上純化柱,加2ml 80%的Isopropanol(異丙醇), 然后裝上拉桿,慢慢推出液體以清洗柱子;
    5)再次卸下注射器筒,將純化柱裝在1.5ml離心管上,10000g離心2 min,以干燥樹脂;
    6)再將純化柱裝在一個新的1.5ml離心管上,加30-50μl水或TE緩沖液,1分鐘后,10000g離心20秒,溶出DNA片段;
    7)移去純化柱,將純化出的DNA溶液取出部分用于酶切,其余在-20℃下保存備用
    補充幾點本人在試驗過程中的經驗:
    1)用50~60度溫育過的水洗脫可以提高DNA的回收效率;

    2)可適當降低離心的轉速,讓DNA緩慢的通過純化柱,這樣也可以提高DNA的回收效率。

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