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  • 發布時間:2019-09-13 12:47 原文鏈接: 離子交換層析實驗

    • 基本方案

    • 離子交換層析介質和層析柱的選擇

               

    實驗材料

    蛋白質

    試劑、試劑盒

    離子交換緩沖液

    儀器、耗材

    離子交換層析柱 梯度混合器 電導表

    實驗步驟

    1.  配制離子交換層析緩沖液,安裝好層析柱,但以離子交換層析緩沖液取代其中的凝膠過濾緩沖液。
     


    圖一、用于蛋白質離子交換層析的梯度混合儀器
     

    2.  用起始梯度的緩沖液溶解含蛋白質混合物的樣品。

    3.  棄去柱床上部的大部分緩沖液,并將樣品加在凝膠的頂上。只要樣品的離子強度不超過起始緩沖液的離子強度,上樣體積不限。

    4.  讓樣品流入凝膠柱床,并用緩沖液沖冼層析柱的內壁,用吸管往凝膠的頊上 加一層1 cm 高的緩沖液。

     

    5.  連接梯度混合器,分部收集100個級分,每個組份相當于約1%總禪度體積。測各組分的A280以確定蛋白峰的所在,用電導表測離子強度以確定禪度的形狀。


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