第三代數字PCR技術應用分享

數字PCR技術即Digital PCR技術真正實現了對目標DNA或RNA分子進行絕對定量，在精密度、準確度和靈敏度方面有無與倫比的優勢，同時解除了對Ct值和標準品的依賴，提高了抑制劑的耐受能力，因此被稱作第三代PCR技術。

Naica crystal 全自動微滴芯片數字PCR儀系統自動化生成25000~30000個微滴2D陣列，將DNA/RNA模板碎金分布在微滴中，達到每個微滴中只含有1個或不含有DNA/RNA模板，自動進入PCR程序，實現核酸的單分子擴增，最后通過對微滴2D陣列進行掃描后，讀取陽性微滴數，從而獲得目標分子的濃度，還實現了結果的可視化質控。人工操作只需5分鐘，2.5小時內即可獲得結果，且實現了3個熒光通道檢測。

作為靈敏度最高的分子生物學工具，能夠準確地區分低于2倍的濃度差異，并提高高背景內源基因中目標分子的分辨能力（如母體DNA為內源基因和胎兒DNA為目標己分子），在如下領域中都有廣泛的應用：

腫瘤學研究

腫瘤學研究是數字PCR的重要應用領域，該技術作為極為重要的工具，能夠識別DNA突變（例如EGFR）、腫瘤患者用藥監控、基因擴增檢測、循環腫瘤細胞（CTC）特性研究、長鏈非編碼RNA檢測、液體活檢中循環的核酸（cfDNA）和腫瘤細胞（CTC）的絕對定量等研究中。

糖尿病

數字PCR技術目前在糖尿病中的研究熱點，通過定量檢測非甲基化DNA的水平，對I型糖尿病β細胞死亡進行定量，從而監控病情發展。

器官移植監控

為了降低移植物排斥導致的風險，數字PCR技術通過監測受體中移植器官供體的循環DNA水平來檢測早期移植排斥。

食品和轉基因生物檢測

食品行業提供健康安全和優質的產品，并希望能夠將這些信息傳遞給消費者。數字PCR技術能夠檢測和定量轉基因含量、來源于轉基因的原料或其他食品中常見的致病微生物，從而確保安全和品質。

產前篩查

目前通過非侵入性產前檢測項目（NIPTs）的增加，降低了流產的風險。通過檢測循環血液中的胎兒DNA，數字PCR技術作為無風險的胎兒基因分型檢測方法，可以檢測非整倍體，微缺失，突變等。

肥胖

數字PCR技術能夠檢測到引起肥胖的重要因素之一AMY1（唾液淀粉酶）的基因拷貝數。

傳染性疾病

數字PCR技術可用于檢測病毒感染和細菌、HIV病毒潛伏庫^*監測、殘留病毒載量（HIV，肝炎）等。

*病毒潛伏庫是指在免疫反應和抗病毒治療壓力下，病毒潛藏的細胞場所或解剖場所。

環境監測

為了增加土壤肥力，農民通常會使用糞便或污水污泥等有機物。為了評估人類及生態系統是否暴露于經土壤傳播的病原體和抗生素抗性基因，可以使用數字PCR技術進行檢測和精準定量，對于其他類似現象的研究也同樣具有應用意義。