乳鐵蛋白廣泛分布于人和哺乳動物乳汁和其他多種組織及其分泌液中（包括淚液、精液、膽汁、滑膜液等內、外分泌液和嗜中性粒細胞），但乳汁中含量較高，其中牛初乳中乳鐵蛋白含量最高。血液中乳鐵蛋白主要由多核細胞分泌，骨髓、唾液腺及子宮內膜等也能分泌少量乳鐵蛋白。
人乳中乳鐵蛋白濃度約為1.0-3.0mg/mL，是牛乳中的10倍（牛乳中含量為0.02-0.35mg/mL），占普通母乳總蛋白的20%，在泌乳期間，乳鐵蛋白含量隨著泌乳時間的不同而發生變化，如人初乳中乳鐵蛋白可達6-14mg/mL，常乳期降至1mg/mL。母牛產后第一天初乳中的乳鐵蛋白含量可達1mg/mL。當奶牛牛奶中乳鐵蛋白在泌乳末期的含量又會上升。