式中Kd為 Fura-2與Ca 結合反應的介離常數，37℃時其值為224nmol/L,Fmax是細胞內Fura-2全部為Ca飽和時的熒光比值（采用Ca 載體），Fmin為Fura-2完全未結合Ca 時的熒光比值。通過向介質中加入過量的EGTA將細胞內外的游離Ca 螯合，此時測得的最小熒光值。F為實驗中以340nm和380nm波長激發，500nm波長發射測定負載Fura-2/AM細胞的熒光比值。
靜息態時[Ca ]i<0.1umol/L。[Ca ]0濃度為1～１.5mmol/L,細胞內外[Ca ]相差104。細胞膜內外的[Ca ]差是細胞外的Ca 進入細胞內的推動力。
(組織細胞以12.5%胰蛋白酶消化20－30 min)
37℃溫育10min, 加入Fura-2/AM（終濃度為2-5ug/ml），37℃恒溫震蕩45 min,負載后細胞以含0.2%牛血清白蛋白的Hank’s液洗2次，用Hank’s液調細胞數為1×106，測定前37℃復溫5-10 min。
37℃溫育10 min，測熒光（負載Fura-2/AM細胞的熒光比值F）
↓
加Triton X 100 100μl
↓
37℃溫育5 min
↓
340nm測熒光（最大值Fmax）
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20℃水浴5 min
↓
冰浴 2 min
↓
加EGTA 80μl（40mM）
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水浴5 min → 冰浴 5 min
↓
380 nm 測定熒光（最小值Fmin）