細胞化學染色,是一種以形態為基礎,結合運用化學或生物化學技術對血細胞內各種化學成分作定位、定性及半定量分析的方法。用于研究血細胞生理、病理和化學結構;臨床上為某些血液病的診斷、鑒別診斷、療效觀察、預后監測和發病機制的探討,提供重要依據。
血細胞化學染色的基本要求是在原位顯示細胞成分和結構,反應產物應是有色沉淀物,具有一定的穩定性。血細胞化學染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質等。
(一)固定
固定有物理法與化學法,
物理法為干燥和火焰固定,
化學法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。
(二)顯示
1、偶氮偶聯法:利用人工合成的酶底物,在酶作用下,產生分解產物,再與重氮鹽結合引起偶氮偶聯,使其形成不溶性的偶氮色素,以此證明酶的存在。
2、聯苯胺法:粒細胞和單核細胞中的過氧化物酶作用于過氧化氫,釋放新生態氧,使無色的聯苯胺形成藍色沉淀。
3、普魯士藍法:細胞內、外鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用,形成藍色亞鐵氰化鐵沉淀。
4、雪夫反應:過碘酸氧化細胞內糖類中乙二醇基形成乙醛基,醛基與雪夫試劑作用,使無色品紅形成紅色沉淀。
5、金屬沉著法
其他尚有物理學方法,如脂溶性染料染色(顯示脂質)、熒光顯示、放射自顯影以及體外活體染色亦常用于臨床血液細胞學診斷。
(三)細胞化學定量
粗略估量,以染色反應的強弱,受色的深淺,人為地區別為陰性和各種程度的陽性。
百分法,只能反映細胞陽性率,不能反映受色強弱。
積分法,是常用的半定量法,將等級估量與百分率相結合它既反映了細胞陽性率的高低,又反映了細胞受色的強弱。
下面介紹幾種常用的細胞化學染色方法
這些方法學在白血病的鑒別診斷上具有重要意義。
一、過氧化物酶染色(POX)
(一)四甲基聯苯胺法
【原理】 粒細胞和單核細胞的胞漿內的髓過氧化物酶(POX orMPO)分解過氧化氫,釋放新生態氧,使無色聯苯胺氧化成藍色聯苯胺,后者進一步變成棕色化合物沉著于細胞質內。
【試劑】
1%TMB
亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液
1%過氧化氫溶液
稀過氧化氫溶液
瑞氏染色液