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  • 發布時間:2019-08-02 23:42 原文鏈接: 細胞總RNA的提取

    提取細胞RNA的步驟:
    1)  六孔板每孔細胞中加入1ml Trizol,冰上放置5min,槍頭吹打。
    2)  將各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中,加入氯仿0.2ml/管,用力振搖15s。15-30℃下孵育2-3min,離心(4℃,12,000g,15min)。
    3)  離心后液體分為三層(上層-無色水樣層為RNA,中層白色為DNA和底層紅色為蛋白質),小心吸取上層無色液體移入一新的EP管中。
    4)  加入等體積異丙醇,0.4-0.5ml,混勻,15-30℃下孵育10-30min,離心(4℃,12,000g,10min)。其中如果加入等體積異丙醇后,置于試管架上用PE手套密封后,放于4℃冰箱中,沉淀30min效果更好。
    5)  去上清,沉淀加入75%乙醇1ml,漩渦振蕩30s,離心(4℃,7,500g,5min)。
    6)  小心去上清,管內沉淀在超凈臺中鼓風靜置干燥3-5min。最好是用槍頭吸取上清,盡量除去。
    7)  加入20ul DEPC水溶解,分裝5ul/管,-70℃冰箱保存。
    8)  細胞總RNA的鑒定:0.9-1.2%瓊脂糖電泳鑒定細胞總RNA,觀察出現條帶及各條帶亮度。紫外分光光度計測定:分別測定細胞總RNA在260nm和280nm處的光密度值(OD),并計算RNA的含量和純度。

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