實驗方法原理 玻片凝集反應(slide agglutirlation)是將已知的抗體直接與未知的顆粒性抗原物質(如細菌,立克次體,鉤端螺旋體等)混合,在有適當電解質存在的條件下,如兩者對應便發生特異性結合而形成肉眼可見的凝集物,即為陽性:如兩者不對應便無凝集物出現,即為陰性。此法屬定性試驗,主要用于細菌鑒定和分型等。
實驗材料 傷寒桿菌大腸桿菌培養物傷寒桿菌診斷血清生理鹽水
儀器、耗材 潔凈載玻片接種環酒精燈特種鉛筆試管試管架吸管
實驗步驟
1. 取載玻片一張平置實驗臺上,用特種鉛筆或記號筆劃分為三格,并標明1,2,3。
2. 用1 ml 吸管吸取生理鹽水1~2 滴于玻片第1 格內,另取一支吸管,吸取1:10 稀釋的傷寒桿菌診斷血清1~2 滴于第2,3 格內。
3. 將接種環在酒精燈火焰上燒灼滅菌,冷卻后取少許傷寒桿菌培養物與第1格內的生理鹽水混合,并涂抹成均勻懸液。然后用同法取少許傷寒桿菌培養物與第2 格內的診斷血清混合,并涂抹均勻。燒灼接種環,待冷卻后取少許大腸桿菌培養物與第3 格內的診斷血清混合并涂抹成均勻懸液。靜置數分鐘后觀察結果。
[結果觀察]
如上述混合懸液由均勻混濁狀變為澄清透明,并出現大小不等的乳白色凝集塊者即為陽性;如混合物仍呈均勻混濁狀則為陰性。如肉眼觀察不夠清楚,可將玻片置于顯微鏡下用低倍鏡觀察。
本次實驗結果第2 格內應出現大小不等的乳白色凝集物(陽性),第1 ,3 格內無凝集物(陰性)
注意事項
1. 傷寒桿菌為腸道致病菌,在實驗中務必嚴格無菌操作,遵守實驗規則,用后的載玻片應立即放入盛有消毒劑的容器內,接種環必須作燒灼滅菌處理。
2. 取細菌培養物時,不宜過多,與診斷血清混合涂抹時,必須將細菌涂散,涂均勻,但不宜涂得太寬,以免很快干涸而影響結果觀察。