血栓與止血臨床檢驗的影響因素

上海第二醫科大學附屬瑞金醫院  王鴻利 王學鋒    
上 海 血 液 學 研 究 所 

 在血栓與止血檢驗的全過程中，實驗結果會受到諸多因素的影響。常見的有受檢者狀態、標本采集、抗凝劑與檢測試劑盒、設備和儀器、實驗方法、操作者技術以及血小板聚集等七個方面的因素。現分別簡述如下。

一、受檢者狀態的影響
    受檢者的狀態， 如被測者生理變化、飲食改變、環境因素、服用藥物等引起變化，在采集血標本時若未注意到這些因素也會對結果做出錯誤的判斷。例如劇烈運動和月經期纖溶活性增高，高脂肪食物造成血脂升高可抑制纖溶活性，吸煙可使血小板聚集性增高，飲酒可抑制血小板聚集性。口服避孕藥可增加凝血活性、降低纖溶活性，ticlopidine、阿司匹林等抑制血小板功能，肝素和口服抗凝劑等抑制凝血機制，尿激酶（UK）和葡激酶（SK）等可促進纖溶功能等。目前國內應用這些藥物者較多，均應注意。

    在實驗研究中應用動物血標本，除一般注意事項外，要明了種屬差異，尤其在篩選藥物和用動物模型進行藥理學研究時更應特別注意。

二、標本采集的影響

    標本必須按照規定方法采集（詳情參照NCCLS H2l-A2文件，1991），以保存凝血因子的全部特性，嚴格防止凝血因子和血小板被激活。

    （一）  采血方法  采血前首先要確認病人的身份，并在容器上注明病人的姓名、性別和病歷號，然后再次確認，若可能的話，對于多次反復采血的病人最好在同一條件下采血，如病人處于靜息狀態的早晨或早餐前。

    對于大多數止凝血試驗最好采用雙筒注射器采血，但不能使用血氣用注射器，因內含肝素會使凝血試驗的結果延長。通常，第一管血液用于其他化學試驗，第二管血液用于止凝血項目的檢驗。另外，止血帶不應扎得太緊，最好不要超過5分鐘，并應強調采血順利，若采血速度緩慢或采血困難，會激活凝血機制，使凝血因子活性增高、血小板假性降低。為保證實驗結果的準確性，最好采用硅化或塑料注射器，其容量誤差要求小于10％。針頭必須采用2l號以上（外徑0.8mm以上），兒童可用23號。采完血后應拔掉針頭，沿管壁將血液緩緩注入試管，要避免產生氣泡，因為泡沫的產生可使纖維蛋白原、因子V和因子Ⅶ變性。然后迅速將血液和抗凝劑輕輕的顛倒混勻，避免用力振蕩而破壞凝血蛋白。

    （二）  標本的貯存  血液要求采集于塑料或硅化試管中，并采用塑料移液管分離血漿。血漿最好貯存在塑料或硅化、帶塞子的試管中，因為玻璃可以激活凝血過程，影響試驗結果。未加塞子的試管放置室溫會使血液中的CO2丟失，PH增高，使凝血酶原時間（PT）或活化部分凝血活酶時間（APTT）的結果延長。

    全血貯存在4~10℃不超過2小時，最好在1小時內分離血漿。富血小板血漿（PRP）要求在室溫20~25℃下，以200~400g離心分離10分鐘，我國采用800rpm，離心5分鐘分離。在室溫22~24℃下，富血小板血漿可存放3小時。大多數凝血試驗采用乏血小板血漿，應以1000g以上離心20分鐘，我國采用2000~2500rpm，離心30分鐘分離，以去除全血中的血小板第3因子（PF3）、血小板第4因子（PF4）和某些凝血因子。乏血小板血漿在室溫22~24℃下可存放2小時，不同存放溫度和時間對凝血因子活性的檢測會有不同程度的影響，尤其是對因子VIII、因子IX和因子XI活性會有較明顯影響，結果見表l。總的看來，冷凍血漿中的凝血因子在越低溫度下越穩定。

  全部試驗不能在4小時內完成，應將血漿分裝在小試管（0.5~1.0ml）中快速冷凍，貯存于-20℃或-70℃冰箱中。若不冷凍保存可使凝血因子活性異常，導致試驗結果延長，而冷凍過的標本不能再次冷凍，否則結果會不準確。

    冷凍血漿融化時，不能在室溫中讓其自然融化，這樣會使纖維蛋白原析出和凝血因子消耗。應將盛冷凍血漿的容器置37℃水浴中，并輕輕搖動，使其迅速融化。

    用于DNA分析標本，可以用枸櫞酸鈉或EDTA抗凝，采血量l0ml，離心后去除血漿，留取500ul血漿，然后取白細胞、血小板和紅細胞層混合液500ul移至冷凍管中，-70℃或-80℃保存。