調整HPLC的流動相有哪些原則？

液相色譜儀的流動相調整非常重要，一般來說，應該考慮以下方面。

  一 由強到弱。一般先用90%的乙腈/水進行試驗，這樣可以很快地得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑的比例。

  二 三倍規則。每減少10%的有機溶劑的量，保留因子約增加3倍，此為3倍規則。調整過程中，注意觀察各個峰的分離情況。

  三 粗調轉微調。當分離達到一定程度后，應將有機溶劑10%的改變量調整為5%，并根據此規則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。

  四 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此，要求流動相還必須具備如 下特點：

  1 流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中。

  2 流動相與樣品不產生化學反應。

  3 流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低壓降，延長泵的使用壽命。

  4 流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

  5 流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。

  6 流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。