實驗方法原理 酵母細胞的裂解方法有很多種,包括自溶、壓力破碎(如French加壓罐)、研磨(玻璃珠振蕩)和酶裂解(如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨,是最簡便的方法之一。這對于小體積(如<1mL的)和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測,細胞破碎率一般>95%。
實驗材料 新鮮培養的酵母細胞
試劑、試劑盒 裂解緩沖液(RIPA緩沖液)PBS
儀器、耗材 預冷的玻璃珠
實驗步驟
①在微型離心機上離心3mm,以收集細胞。
②去上清,用PBS重懸細胞,再離心3min。
③去上清,估算細胞沉淀的體積,向細胞沉淀中加人3倍體積的冰浴裂解緩沖
液,懸浮后置于冰上。
④加入等體積的預冷玻璃珠。
⑤劇烈振蕩懸浮液30s。
⑥重復步驟⑤,并在相差顯微鏡下觀察,直到大部分酵母細胞被裂解。
⑦4℃條件下在小型離心機中離心懸浮液5min,
⑧小心地倒出上清,并轉移到另一管中,置于冰上備用。
注意事項
器材預處理:將玻璃珠在1mol/L的HCl中洗兩遍,然后在裂解緩沖液中洗兩遍。將洗過的玻璃珠液泡于4℃條件下儲存在少量的裂解緩沖液中。