酶標法自七十年代提出以來,經過不斷地發展現已成為檢驗某些指標的主要方法,與此同時,作為專用于微孔板比色的酶標儀也獲得了很大的發展。酶標儀不僅應用在醫療行業,用于酶聯免疫學的檢測工作,而且在食品衛生、農業、畜牧等產業也廣泛用于營養成分、添加劑、農藥殘留量、菌毒素、無機毒素、抗生素激素殘留、致癌物質殘留、有毒有害物質污染等檢測。這些應用都與人類的健康息息相關,所以酶標儀的檢定具有非常重要的意義,下面就對其吸光度示值誤差進行不確定度評定。
1、測量方法
首先將被檢定酶標儀預熱20min,然后用標準酶標板對其在不同波長下進行測量,儀器平均測量值 與標準酶標板標稱值 之差,即為示值誤差 。
2、數學模型
示值誤差公式: = -
式中: —酶標儀吸光度示值誤差; —酶標儀吸光度示值的算術平均值; —酶標儀吸光度標準濾光片的標準值。
3、計算標準不確定度的分量
3.1酶標儀透射比濾光片吸光度定值的的不確定度分量u1
證書中1.0的透射比濾光片的吸光度值為0.914A,其擴展不確定度U為0.005(k=2),則:
透射比濾光片的定制標準不確定度為:
u1=0.005/2=0.0025A
3.2標準酶標儀年變化量帶來的不確定度分量u2
根據JJG861-2007《酶標分析儀檢定規程》中的要求,標準酶標板的年變化量應該小于0.005A,按照均勻分布處理,其標準不確定度為:
3.3酶標儀重復性測量引起的標準不確定度分量u3
測量重復性是測量人員從重復性測量中引入的,對一臺酶標儀,若在波長450nm下,選擇吸光度標稱值為0.914A的中性標準濾光片,連續測量10次,得到測量值為:0.911、0.911、0.910、0.908、0.909、0.911、0.908、0.911、0.910、0.908(A)。
單次實驗標準差
對同一臺儀器,依次選用波長405nm、450nm、492nm、630nm,分別測量標稱值為0.2A、0.5A、1.0A、1.5A的光譜中性濾光片。以空氣為參比,各在重復性條件下連續測量10次,共得到16組測量列,每組測量列分別計算單次實驗標準差如表1所示。
5、 合成標準不確定度
6、結果
取置信概率 ,查t分布表得到
則擴展不確定度為
則酶標儀吸光度的示值誤差測量結果的擴展不確定度為:
U95=0.01A k=2
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