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  • 發布時間:2020-07-06 21:40 原文鏈接: 采用酶標法(ELISA)進行三聚氰胺檢測

    本實驗方案采用Thermo Scientific的Multiskan MK3型酶標儀和Wellwash 4MK2型洗板機(由北京平利洋公司提供),,結合Abraxis三聚氰胺檢測試劑盒,以競爭法測抗原的原理對液態奶或奶粉中的三聚氰胺進行檢測分析。

    一、樣品準備
    巴氏消毒全脂奶(液體):
    1)用稀釋液以1:10的比例稀釋牛奶樣品,如在900 μl的稀釋液中加入100 μl牛奶。
    嬰幼兒配方奶粉:
    1)按照配方奶粉的說明,以稀釋液溶解奶粉,如用60 ml稀釋液溶解8.6克奶粉。
    2)用稀釋液以1:5的比例稀釋奶粉溶液

    二、樣品檢測
    1)試劑使用前,應使其溫度恢復至室溫(25±2℃)
    2)吸取100 μl標準品(0, 20, 50, 100, 200和500 ppb)和準備好的樣品加入相應的微孔中。然后,每孔再加入50 μl的三聚氰胺HRP酶標記物。
    3)利用MK3酶標儀的振蕩功能,振板60秒,并在室溫下孵育30分鐘。
    4)孵育完后,將微孔板轉移到Wellwash 4MK2洗板機上進行洗板,每孔加250 μl洗液,洗板四次。
    5)每孔加入100 μl顯色底物溶液,避光孵育20分鐘。
    6)每孔加入100 μl終止液,終止顯色反應。
    7)在MK3酶標儀上讀板,測量波長450nm。

    三、結果分析
    1)以濃度為0 ppb標準品的吸光值為基準(B0),歸一化標準品的檢測吸光值B/B0(B指除B0以外的標準品吸光值)。
    2)繪制以標準品的B/B0為Y軸坐標、對應的標準品濃度為X軸坐標的散點圖。
    3)對該散點圖進行直線擬合。以該擬合曲線的直線方程對待測樣品濃度進行計算。
    4)如果樣品吸光值大于最小標樣的吸光值,則該樣品的濃度<20 ppb;如果樣品吸光值小于最大標樣的吸光值,則樣品的濃度>500 ppb。
    5)結合稀釋倍數,計算最終液態奶或奶粉中的三聚氰胺濃度,如液態奶稀釋倍數是10倍。

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