高效液相色譜（HPLC）常見問題

1、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

樣品量不足：解決辦法為增加樣品量

樣品未從柱子中流出：可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子

樣品與檢測器不匹配：根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器

檢測器衰減太多：調整衰減即可。

檢測器時間常數太大：解決辦法為降低時間參數

檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。

檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。

記錄儀測壓范圍不當：調整電壓范圍即可。

流動相流量不合適：調整流速即可。

檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

2、做HPLC分析時，柱壓不穩定，原因何在? 如何解決?

原因可能有：

泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理；

比例閥失效，更換比例閥即可。

泵密封墊損壞，更換密封墊即可。

溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；

系統檢漏，找出漏點，密封即可。

梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。

3、我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高，請問為什么?

柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；

把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。

將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動性）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；

更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯系。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。

4、液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么?

篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

存在干擾峰，解決辦法為使用較長柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子。