鮭精擔體DNA制備實驗

鮭精DNA

TE酚氯仿乙酸鈉

離心機搖床超聲儀

1.  將TE緩沖液加入裝有干燥鮭精DNA的燒杯中，至鮭精DNA濃度為5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反復吹打后，用攪拌棒于4℃攪拌過夜，最終獲得一種均勻粘稠液體。 

2.  將一個較大的超聲波探頭插入燒杯液體中，通過超聲波將DNA剪切至2~15 kb（平均7 kb ）大小的DNA片段。

3.  用緩沖液平衡酚抽提，將經剪切的鮭精DNA溶液移50 ml 錐形管中，加入等體積緩沖液平衡酚，混勻后于3 000 g 離心5~10 min（或直到清晰地分相為止）。將含有DNA的上相轉移到一個干凈的試管中。

4.  再用1：1 （v/v）緩沖液平衡酚/氯仿、氯仿分別抽提，然后將含DNA的上相轉移到一個適合髙速離心的離心管中。

5.  分別加入1/10體積的3 mol/l 乙酸鈉和2.5體積冰冷的無水乙醇，充分混勻后，于約12 000 g 離心15 min。

6.  棄上清，用70%乙醇洗滌沉淀并干燥，DNA以無菌的TE緩沖液重溶至濃度為5~ 10 mg/ml。

7.  于100℃將DNA變性20 min，然后迅速置于冰浴。用微量離心管分裝DNA，于-20℃保存，需要時再取出解凍，用于轉化實驗之前要重新煮沸。