25 DETECTR達到了aM水平的靈敏度和≤7個堿基的特異性。例如，它能準確地檢測出受試者攜帶的是哪種亞型的HPV。
圖片來源：參考資料2和10
26 在同期Science論文中，張鋒團隊從三個方面著手完善SHERLOCK：多重化、定量化和去熒光。先說多重化：他們挑選了來自兩個不同菌株的Cas13a和來自兩個不同菌株的Cas13b。每個酶的crRNA不同，激活后能剪切的核苷酸對也不相同。這樣，在理論上他們可以構建出一個有4個頻道的多重分析方法。
圖片來源：參考資料9
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在一個實驗中，他們通過包括了兩個Cas13b,
一個Cas13a，和一個Cas12a的SHERLOCK準確地檢驗出一個樣品是否含有塞卡病毒（ZIKV）的RNA，登革熱病毒(DENV)的RNA，
一個靶DNA或一個靶RNA。不同靶分子的信號通過四個不同的熒光頻道（FAM, TEX, Cy5和HEX）分別顯示出來。
圖片來源：參考資料9
28 在定量化的方向上，他們發現以前SHERLOCK中RPA一步使用的引物濃度過高，導至DNA擴增跨越了指數線性增長階段而達到飽和階段，無法定量測量靶核酸分子。這次他們將引物系列稀釋，找到了合適的引物濃度——240nM（中圖）。改進后的SHERLOCK在較寬的樣品濃度范圍內（低至渺摩爾）可持續定量（右圖）。
圖片來源：參考資料9
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SHERLOCK雖然不需要PCR儀，但由于結果的顯示還需要測量熒光信號，它無法真正做到“儀器自由”。這也限制了它在野外、居家、診所、非醫院場所和偏遠地區的使用。張鋒團隊因此嘗試開發金標層析格式的SHERLOCK，以通過顏色變化來讀取結果。報告RNA兩端的熒光素和淬滅劑被分別置換成biotin和FAM。如果報告RNA沒有被剪斷，金納米顆粒－FAM抗體－FAM－報告RNA－biotin耦合物就會被strepavidin滯留在第一條線上，第二條線則不顯色。如果報告RNA被剪斷，金納米顆粒－FAM抗體－FAM被釋放，就能跑到第二條線上，被protein
A滯留。所以診斷結果的陽性或陰性可通過第二條線顯色或不顯色判讀。這與驗孕棒的使用類似。
圖片來源：參考資料9
30 張鋒團隊用金標層析格式的SHERLOCK成功地檢測到濃度低至2aM的塞卡病毒RNA。整個測試只需1小時。
圖片來源：參考資料9
31 金標SHERLOCK也可以被用來做癌癥病人的快速液體活檢。從非小細胞肺癌（NSCLC）患者的唾液樣品中，他們可以檢測到游離DNA中是否含有突變的EGFR基因（L858R）。至此，從多重化、定量化和去熒光三個方面，張鋒團隊在實驗室里完成了對SHERLOCK的第一次技術迭代。
圖片來源：參考資料9
32 在下一篇Science論文中，張鋒實驗室與哈佛的Pardis Sabeti實驗室合作，繼續將SHERLOCK向產業化的方向推進。這次他們的主攻方向是病毒即時檢測。近些年來，全球屢遭各種病毒瘟疫的肆虐。如果我們在疫情初發時，就能開發出快速、準確的現場診斷方法（POCT)，那么疫情的擴散就可以得到有效的控制。這個方法要非常robust（“皮實”、穩健、抗干擾）和便捷，適用于各種條件。為了直接從患者的體液樣品中分析、讀取信號，兩個團隊發明了HUDSON技術（Heating Unextracted Diagnostic Samples to Obliterate Nucleases）, 通過加熱的方式（還加了TCEP/EDTA）先滅活核酸酶再滅活病毒，最后通過SHERLOCK診斷。所有反應都在一個容器內進行，不需要換液、提純（與圖20對比）。他們可以用HUDSON+SHERLOCK從患者的血清、唾液或尿樣中高靈敏度地檢測出塞卡病毒的RNA——熒光或金標兩種格式都可以。
圖片來源：參考資料15
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在疫區診斷時不但要知道是何種病毒感染，還要判斷出是哪種病毒亞型。他們也設計了DENV的診斷套餐，從患者的體液樣品中迅速診斷出含有哪種或哪幾種亞型的DENV（右下圖中上數第二個和第五個樣品就攜帶兩種亞型病毒）。這個套餐測試不是多重測試，而是把RPA擴增產物分成幾份兒，通過不同的crRNA和相同的Cas13平行測定。測定結果非常準確，沒有假陽性或假陰性結果。
圖片來源：參考資料15
