標 準
GB/T 4789.3-2003 大腸菌群測定 03版只有一個方法:MPN法,也有人叫九管法。 陽性的方法步驟: 制樣→接種到乳糖膽鹽發酵管→伊紅美藍培養基→乳糖發酵管(同時做革蘭氏染色)→看表計算。 其實這個方法比較簡單的一個方法,也是常說的半定量的方法。 我們下面說一下這個方法的注意事項。 第一,這個方法是一個半定量的方法,最不好要用于測量審核上。 第二,做實驗前要注意導管里是否有空氣(最好使用大直徑的小導管),以免影響結果的判斷,增加工作量。 第三,經常有人會無視標準有一個糞大腸的檢測步驟。這個很少人會去做。 第四,對伊紅美藍的陽性現象不了解(其實實驗室可以在做出陽性結果之后,將菌接出來,以后用來做人員培訓)。 第五,對標準是否還在實行不清楚,很多人在16版出來的時候,都在問03版是不是也作廢了,其實并沒有。03版目前還在執行著(畢竟還有些標準還在用著它的單位)。
GB 4789.3-2016 大腸菌群計數
這個標準里有兩個方法:MPN法和平板計算。
首先說MPN法,它相對于03版的MPN有一定的區別。第一這兩個方法用的培養基完全不一樣。第二16版的方法沒有伊紅美藍畫線,這樣的過程減少了一步相對簡單一點。第三單位變了。
平板法:其實平板是我們目前用得最多的一個方法,步驟看標準的實驗流程圖。
那么平板法有什么注意的呢?
第一,做平板法的時候需要覆蓋第二層培養基,它的作用是:有助于典型菌落形成也為了防止蔓延性細菌生長。
第二,挑菌,其實這一步主要怕挑菌的時候挑不到菌,其實你可以把帶菌的部分培養基完全挑起來(不要怕培養基包含著它出不來)放到BGLB內,然后用手腕力搖一下試管就可以把培養基打碎。
第三,計算問題,標準挑取10個典型菌落。然后計算比例再乘以所有典型菌落的數(有人會在這里糾結,覺得不太準確,應該所有菌落都挑取)其實這個一個想法很好,但是這樣之后增加工作量的同時影響效率。其實在平板上你應該區分典型菌落出來去做就可以(當然這步要考驗一個人的眼力和經驗)初學者可以根據形態進行分類,然后以形態特征進行驗證。
兩個版本的一些檢測方法和注意事項都說了,那么我們說一下一些朋友常問的一些問題。
1. 03版的結果能不能和10版的結果進行換算和比較。
答:其實換算是不行的,這個兩個不同的標準。如果只是進行比較兩個結果是可以的,但是不建議。
2.如何選擇檢測方法?
答:你要根據產品的執行標準去選擇檢測方法,不是說你喜歡那種就可以用那種。
3、同一批產品,檢測的兩份結果不一樣,是不是那里出問題?
答:其實不是出問題,這個是正常的,同一批產品不代表他們的微生物檢測結果是一模一樣的,如果是這樣也沒必要做五份去驗證產品合格了吧?如果說同一份樣品(制成一份樣)出現結果差好遠的話,這里就要去分析那里出問題。
好像就這些問題比較常見。
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