實驗材料 IL-4誘生
試劑、試劑盒 生理鹽水淋巴細胞分層液FCS-IMDM培養液PHA
儀器、耗材 細胞培養板培養箱
實驗步驟
一、IL-4生物學活性測定
CT.4S細胞懸液制備①
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接種細胞于96孔培養板②
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加待測樣品和標準品③
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加3H-TdR④
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收集細胞，測定3H-TdR摻入量⑤
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繪制標準曲線，計算待測樣品的IL-4的活性單位⑥
注意事項
①用0.25%胰酶消化、收集生長旺盛的貼壁CT.4S細胞；經Hank’s液離心洗滌2次后，10%FCS-RPMI-1640培養液調制細胞濃度為1×105/ml。
②接種細胞于96孔細胞培養板，每孔0.1 ml。
③加入適當稀釋的待測樣品和標準品，每孔0.1 ml。每個樣品設3個復孔，同時設培養液對照。37度，5%CO2孵育48小時。
④與⑤同IL-2。
⑥以cpm為縱坐標，對應的不同稀釋濃度IL-4標準品濃度為橫坐標，在半對數圖紙上繪制出標準曲線，再從標準曲線上查出待測樣品中的IL-4含量。
關鍵點在IL-4誘生過程中，常同時產生一定量的IL-2，將影響IL-4的檢測結果。因此，最好采用IL-2mAb吸附劑除去IL-2。
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