引物設計主要是要注意以下幾個事項：
（1）發夾結構；
（2）反向配對；
（3）GC含量（40－60%）；
（4）退火溫度（45－65度）；
（5）引物長度（18－27bp）；
（6）3' 端最好是C、G（提高結合度）；
（7）引物在序列中的錯配位點。
大致就這幾個方面，重要性依次降低，由其是3' 端絕對不能形成發夾結構。那么你說你這段能不能設計引物呢？其實設計引物都只是好中選優的問題。
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