擴增產物的測定有各種方法,如電泳、限制性酶切、斑點印跡、探針雜交、測序、分光光度法定量等,但臨床PCR檢驗項目基本上都使用探針雜交方法。
雜交結果不充分的原因可能是基因探針不合適、標記方法不對、對探針的標記不夠、雜交或洗滌方法不合適等。
最常使用的基因探針有:DNA片段、合成的寡核苷酸和體外轉錄的反義RNA探針。探針的標記物常用的有生物素、地高辛、熒光素和同位素等。
在擴增后的雜交檢測中, 應該嚴格遵守商品試劑盒確定的雜交程序和雜交條件。溫度太低或離子強度太高都會降低雜交的嚴格性,還會給檢測信號的特異性帶來負面影響。相反,提高溫度和/或降低離子強度會增加雜交的嚴格性。因此,嚴密控制溫度和試劑的離子強度是避免假陽性和假陰性結果的先決條件。要注意的是,溫度和離子強度不能同時改變。