【實驗原理】
RT-PCR 是以RNA 為模板經逆轉錄反應（Reverse Transcription，RT）產生cDNA 第一鏈，再以cDNA 為模板進行PCR 擴增以檢測目的基因的表達情況。
【實驗儀器】
1. 恒溫金屬浴
2. PCR 擴增儀
【試劑及配制】
RNA PCR Kit (AMV) Ver 3.0
試劑包括：
1. AMV 反轉錄酶XL (5 U/ul)
2. 10×反轉錄反應緩沖液
3. RNAase 抑制劑(40 U/ul)
4. 隨機引物9 mers (50 pmol/ul)
5. RNAase Free dH2O
6. TaKaRa Ex TaqTM HS (5 U/ul)
7. 5×PCR 反應緩沖液
8. dNTP Mixture (各10 mM)
【實驗步驟】
1. 反轉錄反應
1） 按下列組成配制反轉錄反應液
MgCl2 2ul
2. PCR 反應
1） 按下列組成配制PCR 反應液
2） 把此反應液加入到第一階段反轉錄結束后的PCR 反應管中，輕輕混勻；
3） 按以下條件進行PCR 反應：94 ℃ 2 min，94℃ 30 sec、55 ℃ 30 sec、72℃ 4 min、30 cycles，72℃ 5 min。
4） 瓊脂糖凝膠電泳檢測結果。
【注意事項】
1. PCR 條件設定
退火溫度可根據實際情況適當地提高或降低（50℃～60℃）。延伸時間因目的序列長度不同而不同。cDNA 量較少時，循環次數可增加為40～50 次。
2. 當同時需要進行數次反應時，應先配制各種試劑的混合液（MasterMix），然后再分裝到每個反應管中。
3. 使用酶類時，應輕輕混勻，避免起泡；分取前要小心地離心搜集到反應管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時應慢慢吸取。
4. 酶制品應在實驗前才從-20℃中取出，使用后也應立即放回－20℃中保存。
5. 分裝試劑時務必使用新的Tip 頭，防止樣品間污染。
6. 最佳的PCR 條件，因PCR 擴增儀的不同而不同，所以在使用您的樣品之前最好先試做一下Control 反應，以確定最佳的PCR 條件。