用于激酶分析的細胞裂解實驗
實驗方法原理 實驗材料 培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 70% 生長成片／懸浮細胞濃度 為 10^6 細胞／ml）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液蛋白酶抑制劑儲存液儀器、耗材 微量離心機實驗步驟 1. 用預冷的 PBS 洗細胞 2 次，將最后的洗液盡可能吸盡。2. 加入 0.75 ml 裂解緩沖液重懸 2 × 107 個細胞，若是貼壁細胞必須完全覆蓋。加入蛋白酶抑制劑儲存液，使其終濃度為 1 mmol/L PMSF，100 μmol/L 苯甲脒，5 μg/ml 亮抑蛋白酶肽，5 μg/ml抑胃酶肽 A，5 μg/ml抗蛋白酶。3. 4°C 冰浴細胞 10 min，刮離細胞并將裂解液移至標記的微量離心管中。4. 4°C，最大速度離心 10 min，小心地將上清移至新微量離心管中，迅速進行后續實驗。注意事項 若用于免疫沉淀（先使用 25%～50% 的裂解物進行初試驗，再依據結果進行裂解物量的調整）和簡單純......閱讀全文
乙酸激酶的測定實驗
實驗方法原理ATP：乙酸磷酸轉移酯（AK）乙酸+ATP→乙酰磷酸+ADP這個反應可以與丙酮酸激酶（PK）偶聯，乳酸脫氫酶（LDH）反應如下：實驗材料酶樣品試劑、試劑盒三乙醇胺-HCl KOH乙酸鈉ATPMgCl2磷酸烯醇式丙酮酸LDHPK儀器、耗材分光光度計實驗步驟實驗所需「試劑」具體見「其他」0.
乙酸激酶的測定實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 ATP：乙酸磷酸轉移酯（AK）乙酸+ATP→乙酰磷酸+ADP這個反應可以與丙酮酸激酶（PK）偶聯，乳酸脫氫酶（LDH）反應如下：
鈣調蛋白的溴化氰裂解實驗
試劑、試劑盒甲酸純的鈣調蛋白溴化氰乙腈實驗步驟材料甲酸（市售最髙級（如AldrichChemicalCo.，Inc.)純的鈣調蛋白（干粉；無鹽（0.1~1 mg)溴化氰（CNBr)(晶體）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Baker)
質粒的制備實驗——堿裂解法
實驗方法原理質粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或表達的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。質粒的分離與提取是最常用、最基本的實驗技術。質粒的提取方法很多，大多包括3個主要步驟：細菌的培養、細菌的收集和裂解、質粒DNA的分離和純化。本實驗以堿裂解法為例，介紹質粒的抽提過程。在pH 12.0 ~ 12.
鈣調蛋白的溴化氰裂解實驗
試劑、試劑盒 甲酸純的鈣調蛋白 溴化氰乙腈實驗步驟 材料甲酸（市售最髙級（如AldrichChemicalCo.，Inc.)純的鈣調蛋白（干粉；無鹽（0.1~1 mg)溴化氰（CNBr)(晶體）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Bak
鈣調蛋白的溴化氰裂解實驗
鈣調蛋白的溴化氰裂解實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甲酸 純的鈣調蛋白 溴化氰
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
用活化劑裂解方法從懸浮培養的HeLa細胞中制備細胞核實驗材料HeLa 細胞試劑、試劑盒TM-2 緩沖液儀器、耗材塑料離心瓶Corex 管實驗步驟1. 轉瓶培養 4 升 HeLa 細胞，便細胞濃度達到 1.0x106?細胞/ml。2. 細胞在 1 L 的塑料離心瓶中，用 Sorvall 的 RC-3B
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 HeLa 細胞 試劑、試劑盒 TM-2 緩沖液 儀器、耗材
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 TM-2 緩沖液儀器、耗材 塑料離心瓶Corex 管實驗步驟 1. 轉瓶培養 4 升 HeLa 細胞，便細胞濃度達到 1.0x106 細胞/ml。2. 細胞在 1 L 的塑料離心瓶中，用 Sorvall 的 RC-3B 離心機，H-600A 轉頭，3000 r/
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
用活化劑裂解方法從懸浮培養的HeLa細胞中制備細胞核實驗材料HeLa 細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒TM-2 緩沖液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
于免疫印跡的動物培養細胞、酵母和細菌的裂解實驗
實驗方法原理 去垢劑裂解細胞法通常用于培養的動物細胞。典型的離子型去垢劑SDS(如2%SDS)能充分地裂解細胞。培養的動物細胞和細菌，如可以使用這種方式裂解。假如實驗所用的抗體識別的抗原決定簇取決于自然空間構象，并對還原環境敏感，那么在裂解緩沖液中應除去二硫蘇糖醇，并建議使用非還原/無脲的凝膠實驗材
紅細胞裂解液的基本介紹
紅細胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer,或稱 ACK Lysis Buffer）是一種去除紅細胞最簡便易行的方法，即用裂解液裂解紅細胞，它既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細胞去除方法，主要用于經酶消化分散的組織細胞的分離純化，淋巴細
細胞裂解液各成分的作用
細胞裂解液各成分的作用：1、第一種50mmol/L Tris-HCl是緩沖液，保證細胞裂解時PH值也能穩定，Tris是一種有機堿。2、第二種1.0 mmol/L EDTA是一種金屬螯合劑。3、第三種150 mmol/L NaCl是等滲體系電解質，用于協調細胞膜內外離子平衡。4、第四種0.1% SDS
紅細胞裂解液的作用原理
細胞裂解液一般都用的是含酶的,在血紅細胞表面上有紅細胞專屬的表面抗原,當裂解液中含可以攻擊特定紅細胞表面抗原的酶的時候 就只會造成紅細胞的變形,生物通道擴大,膨脹,裂解,或者引起紅細胞的變性.而不會攻擊其他細胞.另外紅細胞有自己的電負性,滲透脆性(通常是一些非酶細胞裂解液的突破點) ,懸浮穩定性,這
細胞裂解液作為對照的原因
WCL的全稱是whole cell lysate,中文就是全細胞裂解液對吧?如果是這樣的話,這個部分的目的就是研究細胞里面你想要研究的蛋白表達情況.IP的就是你用抗體pull down以后得到的目的蛋白.我們做co-IP研究A和B蛋白相互作用的時候,一般會在細胞里面轉染質粒,分別表達A和B蛋白.等蛋
淋巴細胞介導的細胞裂解的技術特點
中文名稱淋巴細胞介導的細胞裂解英文名稱lymphocyte-mediated cell lysis定 義即細胞毒性T細胞或NK細胞可通過顆粒胞吐而分泌穿孔素和顆粒酶等效應分子，損傷靶細胞膜并使之裂解。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫學檢測和診斷（三級學科）
培養細胞標記和裂解物的制備實驗——SDS煮沸法
實驗材料培養細胞試劑、試劑盒SDS裂解液RIPA校正液免疫沉淀洗液儀器、耗材離心機培養箱玻璃培養管實驗步驟1. ?標記和洗滌細胞（溫和去污裂解法，步驟1~7）。?2a. ?對于貼壁細胞：加入適量SDS裂解液至培養皿中。（35 mm 培養皿加0.1 ml，50 mm 培養皿0.25 ml，100 ml
急速裂解法去除紅細胞
器材和試劑：?所有直接接觸細胞的用品和試劑必須無菌。1.?標注體積刻度的試管（圓錐形底）；2.?巴斯德吸管（短型和長型）；3.?臺式離心機；4.?培養級純凈水；5.?2×Hanks平衡鹽溶液；6.?儲存培養基，含10%血清；實驗方法：1.?1000r/min離心原代細胞懸液5min，棄上清；2.?向
常見細胞裂解液及其組分
在許多細胞內蛋白表達、純化及蛋白-蛋白互作等免疫實驗（如WB、IP、Co-IP、ChIP）中，細胞裂解是關鍵一步。 圖片源自于網絡 基本介紹 ? 根據不同細胞類型、蛋白定位及下游應用，需要不同的細胞裂解液進行細
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——酪蛋白激酶
試劑、試劑盒酪蛋白激酶分析緩沖液β-酪蛋白β-酪蛋白儲存液實驗步驟1. 在置于冰上的離心管內配制含下列成分的 20 μl 反應混合物：5X 酪蛋白激酶分析緩沖液? ????????????????????????? 4 μl ?β-酪蛋白?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??????
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——酪氨酸激酶
試劑、試劑盒烯醇化酶酪氨酸激酶分析緩沖液實驗步驟1. 制備酸變性的烯醇化酶從兔肌肉中純化的烯醇化酶通常以硫酸銨沉淀或者懸液的形式存在。(1) 含 100 μg 的烯醇化酶，于 4℃ 全速離心 5 分鐘。(2) 去上清，加入含有 1 mmol/L DTT 的 10 μl 50 mmol/L HEPES
用于活細胞分析的DNA納米結構｜JACS
基于DNA的探針由于能夠識別核酸和非核酸靶點、易于合成和化學修飾、易于與信號放大方案接口以及固有的生物相容性，構成了一個多功能的生物測量平臺。在這里，美國西北大學Chad A. Mirkin教授等人提供了從線性DNA結構到結構更復雜的納米結構的轉變如何徹底改變活細胞分析的演變視角。調節結構產生的
己糖激酶的測定實驗
實驗方法原理直接測量己糖激酶的反應：D-葡萄糖＋ATP → 6-磷酸葡萄糖＋ADP簡單的光度測量是達不到的，葡萄糖的磷酸化最好用測量磷酸或者 ATP32?標記的辦法。由于通過層析，G6P 的實驗必須完全與 ATP 和 ADP 分開，因此，建議應用 HPLC 方法。酶的實驗通常是酶與 G6P 脫氫酶反
己糖激酶的測定實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 直接測量己糖激酶的反應：D-葡萄糖＋ATP → 6-磷酸葡萄糖＋ADP簡單的光度測量是達不到的，葡萄糖的磷酸化最好用測量磷酸或者 AT
激酶的動力學實驗
Km和Vmax的確定 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白底物 試劑、試劑盒
己糖激酶的測定實驗
實驗方法原理 直接測量己糖激酶的反應：D-葡萄糖＋ATP → 6-磷酸葡萄糖＋ADP簡單的光度測量是達不到的，葡萄糖的磷酸化最好用測量磷酸或者 ATP32 標記的辦法。由于通過層析，G6P 的實驗必須完全與 ATP 和 ADP 分開，因此，建議應用 HPLC 方法。酶的實驗通常是酶與 G6P 脫氫酶
簡述紅細胞裂解液的作用原理
氯化銨是紅細胞裂解液的主要效應物質，氨根離子不能通過細胞膜，而其他離子可以通過，造成細胞內外的離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會擴散至細胞內，使紅細胞膨脹，達到裂解的效果。
菌體/細胞裂解的常用方法和配方
、反復凍融法：1.? 將細胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復幾次，由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細胞結構破碎。2.? 至少3次以上凍溶。3.? IFCC推薦法：收集細胞懸液，4℃低溫離心（3000rpm，5min），棄上清，加入一定量PBS（200ul），輕輕吹打混勻，-2
不用Trizol裂解細胞提取RNA的方法
1、方法一試劑：（1）變性液組成：25 g異硫氰酸胍溶于33 ml CSB中（42 mmol/L pH4.0乙酸鈉、0.83%十二烷基肌氨酸鈉、0.2 mmol/L β-巰基乙醇），65 ℃溶解，過濾滅菌，4 ℃預冷。（2）酸性酚配制：55 ℃時，500 g酚溶入500 ml 50 mmol/L，p
菌體/細胞裂解的常用方法和配方
一、反復凍融法：1. ?將細胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復幾次，由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細胞結構破碎。2. ?至少3次以上凍溶。3. ?IFCC推薦法：收集細胞懸液，4℃低溫離心（3000rpm，5min），棄上清，加入一定量PBS（200ul），輕輕吹打混勻，-