【銳賽小課題】miRNA研究之動物總RNA的提取與電泳
動物總RNA的提取與電泳 I． 實驗目的與要求 A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。 B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。 II． 實驗原理和背景知識 A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物大分子，如mRNA,它攜帶了DNA的全部編碼信息。RNA的分離是研究基因功能的重要基礎之一，在分子生物學中占有重要的地位。提取的mRNA可用于Northern blot、RT-PCR、構建 cDNA文庫、Gene Chips以及體外翻譯等實驗。 B. 本次試驗中，由于RNase極穩定，所以，在操作RNA時，要格外仔細，以防RNA被降解。在提取RNA之前，必須對所用器皿進行RNase滅活處理。如用180oC干烤8小時以上處理玻璃器皿，或用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡玻璃器皿和其它用品。所用水以及相關的緩沖液也需要......閱讀全文
腫瘤細胞分泌的exo通過其包含的miR21促進轉移前表型
銳博生物：教科書般的外泌體miRNA研究案例 近日，四川腫瘤醫院的朱桂全老師在Cancer Research發表了一篇研究外泌體miRNA與癌癥的文章。小編認為該研究的思路對廣大外泌體研究者具有很好的參考作用，所以今天給大家帶來這篇文章的詳細解讀。 1、首先，提取exo 方法：
植物總RNA的提取實驗
研磨法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分細胞破碎, 進一步使植物細胞在裂解液中裂解, 用醋酸鈉和氯仿沉淀蛋白質, 異丙醇沉淀核酸, 溶解后經氯化鋰
植物總RNA的提取規程
一、實驗目的掌握植物總RNA提取的原理和方法二、實驗原理RNA的提取：破壞細胞膜—除去蛋白—除去DNA—除去鹽離子。RNase是一類生物活性極其穩定的酶類，能耐高溫、耐酸、耐堿，高壓滅菌處理也不能使其完全失活。在提取RNA實驗中，要盡量抑制RNase的活性。?DEPC（焦磷酸二乙酯）是很強的RNas
植物組織總RNA的提取
實驗概要由于RNA分子的結構特點，容易受RNA酶的攻擊反應而降解，加上RNA酶極為穩定且廣泛存在，因而在提取過程中要嚴格防止RNA酶的污染，并設法抑制其活性，這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA酶，人的皮膚、手指、試劑、容器等均可能被污染，因此全部實驗過程中均需戴手套操作并經常更換（使用一
小麥總RNA的提取方法
實驗步驟1. 所有容器高溫滅菌兩次，DEPC高溫滅菌，所有的試劑用DEPC配制，高溫滅菌。2. 在一滅菌2mL管中加入：5mol/L異硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 稱取0.2g小麥黃化苗的葉片，迅速在液氮中研磨成粉末，轉入已準備好的離心管中，劇烈震蕩。
植物總RNA的提取實驗
實驗方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分細胞破碎, 進一步使植物細胞在裂解液中裂解, 用醋酸鈉和氯仿沉淀蛋白質, 異丙醇沉淀核酸, 溶解后經氯化鋰沉淀總RNA, 洗滌后得到高質量的RNA。本實驗旨在了解和掌握植物總RNA 的分離和純化方法。實驗材料 植物RNA試劑、試劑盒 尿素Tris-HClN
總細胞RNA的提取方法
實驗概要總細胞RNA的提取在建庫過程中，由于cDNA合成這一步將使用通用引物oligo dT，因此在總RNA提取這一步中，提取純化mRNA不是非常必要的。提取高純度的總細胞RNA足可以被用作cDNA合成的模板，目前提取RNA的方法很多，也有不少商業化的試劑盒。實驗步驟1. TRIZOL法?? 1)
多糖多酚植物總RNA快速提取試劑提取水稻胚乳總RNA
實驗概要采用TAKARA的試劑提取水稻胚乳，主要是后期的胚乳RNA量偏少，不易提取！實驗步驟1. 稱量100mg的新鮮或者超低溫凍結的植物RNA提取樣品，迅速轉移至用液氮預冷的研缽中，用研杵研磨組織，其間不斷加入液氮，直至研磨成粉末狀。2. 向研缽中加入1000μL RNAiso-mate for
動物RNA提取實驗原理
RNA提取技術不僅是分子生物學技術的重要組成部分，也是功能基因組 學科研技術的重要基礎。從RNA水平研究生物體內基因的調控機制，已成為分子生物學研究的一個重要手段。對某一生物或組織進行性狀研究，首先要獲得該性狀基因，從組織細胞中分離完整的RNA對于分子克隆 和基因表達分析等實驗是至關
真菌菌絲的總RNA的提取
試劑：RNA提取緩沖液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC處理的水配置），25mM EDTA, 0.5g/L 亞精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巰基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高溫滅
總RNA提取實驗——CsCl法
實驗材料RNA試劑、試劑盒PBS異硫氰酸胍CsClDEPC無水乙醇儀器、耗材注射器電泳儀離心機培養箱實驗步驟一、 用于單層培養細胞?1. ?室溫下用PBS冼滌細胞，每平皿用5 ml，洗2次。2. ?在不超過108細胞中加入異硫氰酸胍溶液，并使之遍布整個平皿。3. ?用橡皮細胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的
植物總RNA的提取實驗技術
一、實驗目的 通過本實驗學習從植物組織中提取RNA的方法 二、實驗原理 RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的 ?RNA，必須最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。高濃度強變性劑異硫氰酸胍，可溶解蛋白質，破壞細胞結構，使核蛋白與核酸分離，失活RNA酶，所以RNA從細胞中釋
細胞總RNA的提取操作步驟
一、準備1、 物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、異丙醇、75%滅酶異醇、冷PBS、1.5ml滅酶EP管、滅酶槍頭、一次性手套、EP管架、吸管 2、 打開冷凍離心機4℃預冷 二、操作步驟： 將Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、滅酶槍頭、一次性手套、EP管架、吸管等物品帶入細胞室。
真核細胞總RNA的分離提取
RNA是基因表達產物，由以下幾類分子組成，rRNA（占細胞總RNA的80%～85%）、tRNA和核內小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。其中mRNA是分子生物學的主要研究對象，分離制備mRNA是克隆基因，分析基因表達以及建立cDNA文庫的首要步驟。真核細胞總RNA分離提取的目的是
Trizol法提取總RNA的原理
Trizol試劑的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是對細胞進行裂解，從而使細胞當中的蛋白質以及核酸物質解聚而得以釋放。苯/酚雖然可以有效的使蛋白質變性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中還加入了8－羥基喹/啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內源和外源RNase（即RNA酶）。Tr
外泌體腫瘤細胞分泌的exo－其包含的miR21促進轉移前表型
銳博生物：教科書般的外泌體miRNA研究案例 近日，四川腫瘤醫院的朱桂全老師在Cancer Research發表了一篇研究外泌體miRNA與癌癥的文章。小編認為該研究的思路對廣大外泌體研究者具有很好的參考作用，所以今天給大家帶來這篇文章的詳細解讀。 1、首先，提取exo 方法：
提取的總RNA跑完電泳條帶總是很淺什么原因
跑變性膠，用專門的染色，一般180V，跑5分鐘就好了，注意跑膠時的溫度，時間過長，溫度過高，RNA很容易降解
總RNA－的非變性電泳檢測
總 RNA 的電泳檢測，原來我使用 Lambda DNA/EcoR I （或者 Hind III）酶切 Marker，現在基本上不再用 Marker 了。指示劑一定是溴酚藍加二甲苯氰，膠濃度 1-1.2%。加樣后，開始電泳 (電壓的選擇的唯一依據是，我后面的時間安排。)。 溴酚藍出孔 2-3cm 后
動物RNA提取實驗——Trizol試劑提取法
實驗方法原理Trizol試劑是一個包含酚、異硫氰酸胍和SDS的單相酸性溶液，其在裂解細胞的同時抑制RNase的活性，隨后加入氯仿，酚會大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下層的氯仿酚溶液中，RNA則分布在上層的水相中，最后用異丙醇沉淀水相中的RNA，并用70
Trizol法提取總RNA提取的注意事項
1.杜絕外源酶的污染。（1）嚴格戴好口罩，手套。（2）實驗涉及的離心管，Tip頭，移液器桿，電泳槽，實驗臺面等要徹底處理。（3）實驗所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保RNase-Free。2.阻止內源酶的活性。（1）選擇合適的勻漿方法。（2）選擇合適的裂解液。（3）控制好樣品的起始量。
總RNA提取實驗——氯化鋰提取法
實驗方法原理用高濃度尿素變性蛋白并抑制RNA 酶，用氯化鋰選擇沉淀RNA ，其特別適合于從大量樣品中提取少量組織RNA ，具有快速簡潔的長處，但也存在少量DNA的污染及RNA 得率不高，小RNA 片斷丟失的缺陷。實驗材料微生物動物細胞植物組織試劑、試劑盒氯化鋰尿素Tris-HCLEDTASDS儀器、
動物組織RNA提取及純化
實驗概要提取樣品組織中的RNA并消除DNA污染實驗原理Trizol裂解細胞使RNA釋放beta巰基乙醇一直RNase活性酚-氯仿抽提分離RNARNase-Free DNase消除DNA污染主要試劑Trizol無水乙醇氯仿（三氯甲烷）異丙醇RQ1 RNase-Free DNase（Promega，M6
真菌菌絲的總RNA的提取方法
1.實驗試劑 (1)RNA提取緩沖液(CTAB):2% CTAB(W/V),2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V),100mM Tris-HCl(pH8.0,DEPC處理的水配置),25mM EDTA,0.5g/L 亞精胺Spermidine,2.0M NaCl,2%巰基乙醇(V/V,使用前加入
怎樣從總RNA中提取mRNA
大多數真核細胞mRNA的3’端通常具有由20-30個腺苷酸組成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脫氧核糖核苷（OligoT）可以與之配對結合，這就是提取mRNA最基本的原理。具體到實驗手段上，現在磁珠法、纖維素柱層析法都有在用。磁珠法一般是用生物素標記OligoT，親和素標記磁珠（生物素和親和素間具有高
卵和胚胎細胞總RNA提取
試劑、試劑盒 Triton X-100勻漿緩沖液 酚氯仿乙酸鈉 乙醇 氯化鋰實驗步驟 一 材料與設備1)5%TritonX-1002) 勻漿緩沖液：50 mmol/LNaCl,50 mmol/LTris-Cl,(PH7.5),5 mmol/LEDTA(pH8.0),0.5%SDS,200ug/ml
卵和胚胎細胞總RNA提取
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 Triton X-100 勻漿緩沖液 酚 氯仿 乙酸鈉 乙醇 氯化鋰
總RNA提取常見問題分析
Q：RNA降解? ?A：1. 新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如??果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。?2. 新鮮組織：某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可
采用Trizol－溶液提取細菌總RNA
實驗概要了解用Trizol 溶液提取細菌總 RNA的方法。實驗原理Trizol主要物質是異硫氰酸胍，它可以破壞細胞使RNA釋放出來的同時，保護RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA ?可以通過異丙醇沉淀來還原。無論是人、動物、植物還
怎樣從總RNA中提取mRNA
大多數真核細胞mRNA的3’端通常具有由20-30個腺苷酸組成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脫氧核糖核苷（OligoT）可以與之配對結合，這就是提取mRNA最基本的原理。具體到實驗手段上，現在磁珠法、纖維素柱層析法都有在用。磁珠法一般是用生物素標記OligoT，親和素標記磁珠（生物素和親和素間具有高
植物總RNA的提取實驗_研磨法
在液氮中研磨植物材料, 使部分細胞破碎, 進一步使植物細胞在裂解液中裂解, 用醋酸鈉和氯仿沉淀蛋白質, 異丙醇沉淀核酸, 溶解后經氯化鋰沉淀總RNA, 洗滌后得到高質量的RNA。本實驗旨在了解和掌握植物總RNA 的分離和純化方法。實驗方法原理在液氮中研磨植物材料, 使部分細胞破碎, 進一步使植物細胞