DNA的限制性內切酶酶切反應的基本原理與實驗技術
[實驗目的]通過本實驗學習DNA的限制性內切酶酶切反應的基本原理與實驗技術。[實驗原理]1.限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結合于識別位點并隨機的切割識別位點不遠處的DNA，而Ⅲ類酶在識別位點上切割DNA 分子，然后從底物上解離。Ⅱ類由兩種酶組成:一種為限制性內切核酸酶(限制酶)，它切割某一特異的核苷酸序列; 另一種為獨立的甲基化酶，它修飾同一識別序列。絕大多數Ⅱ類限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列:5"-G↓AATTC-3")，有少數酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中，有的在對稱軸處切割，產生平末端的DNA片段(如Sma:5"-CCC↓GGG-3&quo......閱讀全文
λ噬菌體DNA限制性內切酶圖譜分析
實驗方法原理λDNA是線狀雙鏈DNA,EcoRⅠ在其上有5個切點,產生6個片段,通過瓊脂糖凝膠電泳可將這幾條片段分離開。如何重建這6個片段呢?可用兩種限制性內切酶同時或先后作用于λDNA。例如λDNA經EcoRⅠ切割后在凝膠上分離開來的6條帶可洗脫出來,然后分別將這6條片段用HindⅢ切割。結果表明
λ噬菌體DNA限制性內切酶圖譜分析
實驗方法原理 λDNA是線狀雙鏈DNA,EcoRⅠ在其上有5個切點,產生6個片段,通過瓊脂糖凝膠電泳可將這幾條片段分離開。如何重建這6個片段呢?可用兩種限制性內切酶同時或先后作用于λDNA。例如λDNA經EcoRⅠ切割后在凝膠上分離開來的6條帶可洗脫出來,然后分別將這6條片段用HindⅢ切割。結果表
λ噬菌體DNA(48502bp)的限制性內切酶酶切片段
沒有的位點：NotI, SfiI,SpelAatI6個位點:12347,31481,33000,39995,40599,40617片段長度:19044,12436,7886,6995,1519,604,18AatII10個位點:5110,9399,11248,14979,29041,40811,41
DNA的酶切消化與凝膠回收
[實驗原理]限制性內切酶是分子操作中重要的工具酶，是一類能夠識別雙鏈DNA分子某種特定的核苷酸序列并切割雙鏈DNA分子的核酸內切酶。可分為3類，Ⅰ和Ⅲ類限制酶兼有甲基化等修飾作用及以來ATP的限制性切割活性，前者結合于識別位點隨即切割DNA，后者則在識別位點切割。Ⅱ類限制酶是由兩種酶分子組成的復合體
質粒DNA的提取、酶切與鑒定
1. DNA 瓊脂糖凝膠電泳 ① 瓊脂糖凝膠的制備：稱取0.6g 瓊脂糖，置于三角瓶中，加入50 mL TBE 緩沖液，經沸水浴加熱全部融化后，取出搖勻，此為1.2%的瓊脂糖凝膠。 ② 膠板的制備：取橡皮膏（寬約1cm）將有機玻璃板的邊緣封好，水平放置，將樣品槽板垂直立在玻璃板表面。將冷卻至65℃左
限制性內切酶切割DNA的原理、儀器試劑和步驟
一、實驗目的1．通過對DNA的酶切，學會設計構建體外重組DNA分子；2．根據目的基因合理選擇載體與限制性內切酶；3．掌握DNA的酶切技術。 二、實驗原理 限制性內切酶是從細菌中分離出來的一種能在特異位點切割DNA分子的核酸內切酶，目前已從多種細菌中分離出超過400種，識別各自不同的核苷
限制性內切酶簡介
限制性內切酶（restriction endonuclease）全稱限制性核酸內切酶，是一種能將雙股DNA切開的酶。切割方法是將糖類分子與磷酸之間的鍵結切斷，進而于兩條DNA鏈上各產生一個切口，且不破壞核苷酸與堿基。限制酶在分子生物學與遺傳工程領域有廣泛的應用。
DNA酶切
一、 DNA酶切反應? 1、 將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號,用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl,再加入重蒸水使總體積為19μl,將管內溶液混勻后加入1μl酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻,也可用微量離心機甩一下,使溶
DNA酶切
一、 DNA酶切反應? 1、 將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號,用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl,再加入重蒸水使總體積為19μl,將管內溶液混勻后加入1μl酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻,也可用微量離心機甩一下,使溶液集中在
關于限制性內切酶的由來
一般是以微生物屬名的第一個字母和種名的前兩個字母組成，第四個字母表示菌株（品系）。例如，從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內切酶稱為Bam H，在同一品系細菌中得到的識別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI
限制性內切酶的生理意義
限制作用實際就是限制酶降解外源DNA ，維護宿主遺傳穩定的保護機制。甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。所以，能產生防御病毒侵染的限制酶的細菌，其自身的基因組中可能有該酶識別的序列，只是該識別序列或酶切位點被甲基
酶切反應的建議
酶切反應建議一、?建立一個標準的酶切反應目前大多數研究者遵循一條規則，即10個單位的內切酶可以切割1μg不同來源和純度的DNA。通常，一個50μl的反應體系中，1μl的酶在1X NEBuffer終濃度及相應溫度條件下反應1小時即可降解1μg已純化好的DNA。如果加入更多的酶，則可相應縮短反應時間；如
簡述Ⅱ型限制性內切酶的用途
用于DNA基因組物理圖譜的組建；基因的定位和基因分離；DNA分子堿基序列分析；比較相關的DNA分子和遺傳工程；進行基因工程編輯。 限制性核酸內切酶是由細菌產生的，其生理意義是提高自身的防御能力. 限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。
簡述Ⅱ型限制性內切酶的由來
一般是以微生物屬名的第一個字母和種名的前兩個字母組成，第四個字母表示菌株（品系）。例如，從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內切酶稱為Bam H，在同一品系細菌中得到的識別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI
影響限制性內切酶活性的因素
1、DNA純度在DNA樣品中若含有蛋白質,或沒有去除干凈制備過程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高濃度金屬離子,均會降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用.2、核酸內切限制酶的緩沖液核酸內切限制酶的標準緩沖液包括氯化鎂、氯化鈉或氯化鉀、Tris-HCL、巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT
限制性內切酶的分類性質的介紹
根據酶的功能特性、大小及反應時所需的輔助因子，限制性內切酶可分為兩大類，即I類酶和Ⅱ酶。最早從大腸桿菌中發現的EcoK、EcoB就屬于I類酶。其分子量較大；反應過程中除需Mg2+外，還需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上沒有特異性的酶解片斷，這是I、Ⅱ類酶之間最明顯的差異。因此，I類
質粒DNA的雙酶切
實驗概要掌握質粒DNA雙酶切的原理和操作方法。實驗原理分子生物學實驗中，基因的重組與分離涉及到一系列的酶促反應。許多種酶在基因克隆實驗中有著廣泛的用途。限制性內切酶是一類能識別雙鏈DNA分子特異性核酸序列的DNA水解酶。多種細菌能合成限制性核酸酶，這是它們保護自己，降解外來DNA分子的重要手段。每一
用于基因組文庫的真核DNA的部分酶切（制備反應）實驗
通過限制酶部分酶切可將高分子質量 DNA 片段化。在預實驗中，建立了適宜的部分酶切條件。對于將用于克隆的基因組 DNA 來說，預實驗的結果確定了對其進行制備的三個大規模反應的條件，這將在本方案敘述。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理通過限制酶部分酶切可將高分子質量 DNA
用于基因組文庫的真核DNA的部分酶切（制備反應）實驗
實驗方法原理 通過限制酶部分酶切可將高分子質量 DNA 片段化。在預實驗中，建立了適宜的部分酶切條件。對于將用于克隆的基因組 DNA 來說，預實驗的結果確定了對其進行制備的三個大規模反應的條件，這將在本方案敘述。實驗材料 限制性內切核酸酶基因組 DNAλ 噬菌體 DNA質粒寡聚體試劑、試劑盒 乙酸銨
用于基因組文庫的真核DNA的部分酶切（制備反應）實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過限制酶部分酶切可將高分子質量 DNA 片段化。在預實驗中，建立了適宜的部分酶切條件。對于將用于克隆的基因組 DNA 來說，預實驗的結果確定了對其進行制備的三個大規模反應的條件，這將在本方案敘述。
限制性內切酶添加保護堿基數目及酶切效率
限制性核酸內切酶產品選擇專題&NBS p;?限制性內切酶?保護堿基A-B&NBS p;酶切效率:&NBS p;- 0%&NBS p;- 0-20%- 20-50%- 50-100%*- 反應時間為16小時酶保護堿基數目12345AarI20-5050-100AasI50-100AatII00-202
限制性內切酶（restriction－enzyme）酶譜分析
一、實驗目的在DNA上以限制性內切酶的酶切位點作為標記所繪制的物理圖譜就是限制性內切酶圖譜，限制性內切酶圖譜與其他相關資料聯合使用，可用于基因克隆、分離和基因功能研究。二、實驗原理（一）酶切圖譜的構建限制性內切酶在DNA上有特異的識別和切割位點，可將DNA切開而得到兩個或兩個以上的大小不同的片段，這
限制性內切酶質量控制
?單位定義限制性內切酶的一個活性單位是指，在50μl 的反應體系里，采用隨酶提供的 NEBuffer，用1個小時的時間，徹底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反應應在帶蓋的Eppendorf 管中進行，選用技術數據卡上所標明的適宜溫度。在確定酶活性之前，濃縮的酶應該用推薦的貯存液稀釋成大約1,
限制性內切酶質量控制
單位定義 限制性內切酶的一個活性單位是指，在50μl 的反應體系里，采用隨酶提供的 NEBuffer，用1個小時的時間，徹底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反應應在帶蓋的Eppendorf 管中進行，選用技術數據卡上所標明的適宜溫度。在確定酶活性之前，濃縮的酶應該用推薦的貯存液稀
限制性內切酶有哪些作用
不同限制性核酸內切酶識別和切割的特異性不同。DNA在限制性內切核酸酶的作用下，使多聚核苷酸鏈上磷酸二酯鍵斷開的位置被稱為酶切位點（或稱為靶序列），可用↓表示。絕大多數的Ⅱ型限制性核酸內切酶，都能識別48個核苷酸組成的特定酶切位點，并且一般是在識別序列內部，如C↓GATCC、AT↓CGAT、GTC↓G
酶切反應心得
一、 建立一個標準的酶切反應目前大多數研究者遵循一條規則，即10個單位的內切酶可以切割1μg不同來源和純度的DNA。通常，一個50μl的反應體系中，1μl的酶在1X NEBuffer終濃度及相應溫度條件下反應1小時即可降解1μg已純化好的DNA。如果加入更多的酶，則可相應縮短反應時間；如果減少酶的用
酶切反應建議
一、 建立一個標準的酶切反應目前大多數研究者遵循一條規則，即10個單位的內切酶可以切割1μg不同來源和純度的DNA。通常，一個50μl的反應體系中，1μl的酶在1X NEBuffer終濃度及相應溫度條件下反應1小時即可降解1μg已純化好的DNA。如果加入更多的酶，則可相應縮短反應時間；如果減少酶
雙酶切反應
雙酶切buffer的選擇： 1、U ：Supplied with its own unique reaction buffer that is different from the four standard NEBuffers. Its compatibility with the fou
簡述限制性內切酶的分布區域
限制性核酸內切酶分布極廣，幾乎在所有細菌的屬、種中都發現至少一種限制性內切酶，多者在一屬中就有幾十種，例如在嗜血桿菌屬中（Haemophilus）現已發現的就有22種。有的菌株含酶量極低，很難分離定性；然而在有的菌株中，酶含量極高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegypti
簡述Ⅱ型限制性內切酶的生理意義
限制作用實際就是限制酶降解外源DNA [1] ，維護宿主遺傳穩定的保護機制。甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。所以，能產生防御病毒侵染的限制酶的細菌，其自身的基因組中可能有該酶識別的序列，只是該識別序列或酶切位