southern印跡雜交的方法步驟
以哺乳動物基因組DNA為例，介紹Southern印跡雜交的基本步驟。一、 待測核酸樣品的制備（一）制備待測DNA基因組DNA是從動物組織（或）細胞制備。1.采用適當的化學試劑裂解細胞，或者用組織勻漿器研磨破碎組織中的細胞；2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白質和RNA；3.用有機試劑（酚/氯仿）抽提方法去除蛋白質。（二） DNA限制酶消化基因組DNA很長，需要將其切割成大小不同的片段之后才能用于雜交分析，通常用限制酶消化DNA。一般選擇一種限制酶來切割DNA分子，但有時為了某些特殊的目的，分別用不同的限制酶消化基因組DNA。切割DNA的條件可根據不同目的設定，有時可采用部分和充分消化相結合的方法獲得一些具有交叉順序的DNA片段。消化DNA后，加入EDTA，65℃加熱滅活限制酶,樣品即可直接進行電泳分離，必要時可進行乙醇沉淀，濃縮DNA樣品后再進行電泳分離。二、 瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品（一）基本原理Southern印跡雜......閱讀全文
Southern雜交的結果分析
在膜上陽性反應呈帶狀。實驗中應注意以下問題：轉膜必需充分，要保證DNA已轉到膜上。雜交條件及漂洗是保證陽性結果和背景反差對比好的關鍵。洗膜不充分會導致背景太深，洗膜過度又可能導致假陰性。若用到有毒物質，必需注意環保及安全。 （1）出現斑點 解決方法：①加熱至合適的溫度；離心或過濾除去顆粒。②
DNA（基因）檢測－Southern－Blot
DNA（基因）檢測－Southern BlotDNA吸印轉移1．室溫下將電泳后的瓊脂糖凝膠浸入500ml溶液A中，搖動30分鐘后換500ml新鮮溶液A再搖30分鐘，使DNA雙鏈堿變性。溶液A：5M NaCl?????300.0ml10M NaOH????50.0mlH2O?????????650.0
DNA印跡（Southern－Blot)實驗
【實驗原理】DNA印跡是1975年由英國Southern創建的。其基本原理是：DNA分子經限制性核酸內切酶酶切后，由瓊脂糖凝膠電泳將所得 DNA片段按分子質量大小分離，然后將DNA片段變性，并使凝膠中的單鏈DNA片段轉移到尼龍膜、硝酸纖維素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA 片段
小麥Southern雜交分析方法
預雜交液的制備：根據要雜交的膜的數量配制預雜交液，每25 ml預雜交液（1~2張膜）的成分組成如下： H2O 15 ml 20×SSPE 6
southern雜交的陽性對照濃度
southern雜交的陽性對照濃度是特定序列定位的通用方法。根據查詢相關公開信息顯示，因為southern雜交的陽性對照濃度是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上,經干烤
southern雜交的陽性對照濃度
southern雜交的陽性對照濃度是特定序列定位的通用方法。根據查詢相關公開信息顯示，因為southern雜交的陽性對照濃度是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上,經干烤
Southern雜交一般操作
一 酶切和電泳在200 μl 微量離心管中加入：25 μl DNA樣品（約10μg），3μl 限制性內切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相應的10×buffer，補水到50μl。然后加一滴礦物油覆蓋, 稍微離心后放于37℃水浴8-12小時。酶切完后，取5μl 酶切DNA樣品于0.8%的瓊脂糖
Southern－雜交一般操作
一 基因組酶切和電泳在200 μl 微量離心管中加入：25 μl DNA樣品(約10μg)，3μl 限制性內切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相應的10×buffer，補水到50μl。然后加一滴礦物油覆蓋, 稍微離心后放于37℃水浴8-12小時。酶切完后，取5μl 酶切DNA樣品于0.8%的
Southern－轉印分析方法步驟
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
Southern雜交的基本概念
Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，
Southern雜交分析原理和操作
【原理】Southern雜交是分子生物學的經典實驗方法。其基本原理是將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上,與標記的核酸探針進行雜交,在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。一．基因組DNA的限制
分子雜交——Southern基因檢測2
C．轉移按凝膠的大小剪裁NC膜或尼龍膜并剪去一角作為標記，水浸濕后，浸入轉移液中5min。剪一張比膜稍寬的長條Whatman 3mm濾紙作為鹽橋，再按凝膠的尺寸剪3-5張濾紙和大量的紙巾備用。按下圖所示進行轉移。（ 轉移過程一般需要8-24hr，每隔數hr換掉已經濕掉的紙巾。轉移液用20×S
Southern－Blot實驗原理及方法
實驗原理：Southern Blot是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，
關于Southern雜交的步驟介紹
1.將標記的DNA探針置沸水浴10min，迅速置冰上冷卻1-2min，使DNA變性。 2.從水浴中取出含有濾膜和預雜交液的塑料袋，剪開一角，將變性的DNA探針加到預雜交液中。 3.盡可能除取袋中的空氣，封住袋口，滯留在袋中的氣泡要盡可能地少，為避免同位素污染水浴，將封好的雜交袋再封入另一個未
Southern－Blot原理及操作方法
原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進行結合，游離探針洗滌后用自顯影或
痘苗DNA檢測實驗——Southern－雜交法
實驗方法原理以前，用 HindIII 限制性內切核酸酶消化鑒定痕苗病毒 DNA。大部分的外源基因插入重組病毒的 TK 基因中，TK 基因位于 HindIII 5.1 kb 的 J 片段上。這樣在重組病毒中，如果插入片段上沒有 HindIII 內切酶位點，則J片段就會增大。如果缺乏 HindIII 5
Southern－印跡實驗——電轉印法
實驗方法原理因為聚丙烯酰胺凝膠的扎徑太小，DNA不能在其橫截面上有效地擴散，毛細管轉移法不適用DNA從聚丙烯酰胺凝膠的轉移。因此，聚丙烯酰胺凝晈必須在低離子強度的緩沖液中用電轉移法進行印跡。實驗材料DNA試劑、試劑盒TBE儀器、耗材Scotch-Brite墊Whatman濾紙實驗步驟1. ?在非變性
關于Southern雜交的探針標記簡介
用于Southern印跡雜交的探針可以是純化的DNA片段或寡核苷酸片段。探針可以用放射性物質標記或用地高辛標記，放射性標記靈敏度高，效果好；地高辛標記沒有半衰期，安全性好。人工合成的短寡核苷酸可以用T4多聚核苷酸激酶進行末端標記。探針標記的方法有隨機引物法、切口平移法和末端標記法。
Southern－blot實驗方法與步驟
用于檢測重組DNA，也可分析DNA樣品中是否有與探針序列同源的DNA片段。用于基因診斷，也可驗證檢測片段的分子量大小。將基因組DNA經限制性內切酶酶切，進行瓊脂糖電泳，把分離后定位在凝膠上的不同分子量的DNA經堿變性處理，將凝膠中變性的DNA轉移至一固相支持濾膜。利用標記的某一DNA、RNA或寡核苷
southern印跡雜交的方法步驟
以哺乳動物基因組DNA為例，介紹Southern印跡雜交的基本步驟。一、 待測核酸樣品的制備（一）制備待測DNA基因組DNA是從動物組織（或）細胞制備。1.采用適當的化學試劑裂解細胞，或者用組織勻漿器研磨破碎組織中的細胞；2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白質和RNA；3.用有機試劑（酚/氯仿）抽提
Southern印跡法的技術方法介紹
Southern印跡法(Southern Blot)是將基因組 DNA經限制性內切酶酶解、瓊脂糖凝膠電泳分離，使DNA片段按分子量大小排列在瓊脂糖凝膠上。經堿處理凝膠使DNA變性（使雙鏈DNA變成單鏈），通過具有一定鹽離子濃度溶液的毛細管作用，將凝膠中變性的單鏈DNA片段原位地吸印到硝酸纖維素濾膜或
southern雜交與northern雜交的區別
研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA。Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上。
southern雜交與northern雜交的區別
研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA。Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上。
Southern印跡技術原理和操作步驟
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
Southern雜交技術的方法和步驟
Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟:(1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。(3)?預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。(4) 讓探針與
Southern－blot實驗方法與步驟
用于檢測重組DNA，也可分析DNA樣品中是否有與探針序列同源的DNA片段。用于基因診斷，也可驗證檢測片段的分子量大小。將基因組DNA經限制性內切酶酶切，進行瓊脂糖電泳，把分離后定位在凝膠上的不同分子量的DNA經堿變性處理，將凝膠中變性的DNA轉移至一固相支持濾膜。利用標記的某一DNA、RNA或寡核苷
分子雜交技術Southern雜交的操作步驟
(1) 約50μl體積中酶切10pg-10μg的DNA, 然后在瓊脂糖凝膠中電泳12-24小時(包括DNA分子量標準物)。 (2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙錠,將凝膠放置其中染色30分鐘, 然后照相。 (3) 依次用下列溶液處理凝膠,并輕微搖動: 500ml 0.2m
Southern雜交待測核酸樣品的制備
（一）制備待測DNA 基因組DNA是從動物組織（或）細胞制備。1.采用適當的化學試劑裂解細胞，或者用組織勻漿器研磨破碎組織中的細胞；2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白質和RNA；3.用有機試劑（酚/氯仿）抽提方法去除蛋白質。 （二） DNA限制酶消化 基因組DNA很長，需要將其切割成大小
Southern雜交一般操作方法
一 基因組酶切和電泳在200 μl 微量離心管中加入：25 μl DNA樣品(約10μg)，3μl 限制性內切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相應的10×buffer，補水到50μl。然后加一滴礦物油覆蓋, 稍微離心后放于37℃水浴8-12小時。酶切完后，取5μl 酶切DNA樣品于0.8%的
Southern－印跡實驗——堿性緩沖液法
實驗方法原理用帶正電荷的尼龍膜時，如果用堿性轉移緩沖液，則轉移的DNA可共價結合于膜上。實驗材料DNA試劑、試劑盒NaOHNaCl儀器、耗材電泳儀實驗步驟1. ?印跡法中步驟1和歩驟2中所述準備凝膠及用0.25 mol/l HCl處理。2. ?用蒸餾水漂洗凝膠，并用10倍體積的0.4 mol/l N