橫坐標是溫度,每個溫度點一個.一般從60到98度
縱坐標是熒光強度的變化值(不是強度本身).一開始加熱的時候,雖然熒光強度比較強,但是由于雙鏈沒有解離,所以熒光強度保持不變.當加熱接近于PCR產物Tm時,雙鏈開始解離,熒光強度變小,機器會比較前后2個溫度點的熒光強度,然后把2者的差值標在圖上.Tm到達時,有一般雙鏈解離,這時的熒光強度變化最大(峰值).再加熱,雙鏈全部解離,所以熒光強度的變化又變小了.
你PCR產物大小不一,但是只要有相同或者相近的Tm,峰值就有可能在一個位置上.如果實際測得的峰值和理論計算的吻合,問題不大.如果有差別,說明有非特異性產物,建議不要再用SYBR GREEN方法.