基線的各種問題匯總

  相信很多人都曾經因為基線波動或基線漂移問題而受到困擾，下文是一些經驗總結，到底是哪些原因導致了基線走不好呢?

　　一、基線漂移(或上下波動)的原因

　　1、柱溫波動。(即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。) 可以通過控制柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖。

　　2、流動相不均勻。(流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。)

　　可以通過使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑解決。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。

　　3、流通池被污染或有氣體，用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)

　　4、檢測器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂，產生噪音基線)，取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。

　　5、流動相配比不當或流速變化 ，更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。

　　6、柱平衡慢，特別是流動相發生變化時 ，用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。

　　7、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成，檢查流動相的組成。使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑

　　8、樣品中有強保留的物質(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。

　　9、使用循環溶劑，但檢測器未調整。 重新設定基線。當檢測器動力學范圍發生變化時，使用新的流動相。

　　10、檢測器沒有設定在最大吸收波長處。 將波長調整至最大吸收波長處

　　基線噪音(規則的)原因、解決方法

　　1、在流動相、檢測器或泵中有空氣 ，流動相脫氣。沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。

　　2、漏液，檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。

　　3、流動相混合不完全 ，用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

　　4、溫度影響(柱溫過高，檢測器未加熱)，減少差異或加上熱交換器。

　　5、在同一條線上有其他電子設備，斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。

　　6、泵振動，在系統中加入脈沖阻尼器

　　基線噪音(不規則的)原 因 、解決方法

　　1、漏液，檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。

　　2、流動相污染、變質或由低質溶劑配成，檢查流動相的組成。

　　3、流動相各溶劑不相溶，選擇互溶的流動相。

　　4、檢測器/記錄儀電子元件的問題， 斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。

　　5、系統內有氣泡 ，用強極性溶液清洗系統。

　　6、檢測器內有氣泡 ，清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調節器。

　　7、流通池污染(即使是極少的污染物也會產生噪音。)用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池

　　8、檢測器燈能量不足 ，更換燈

　　9、色譜柱填料流失或阻塞，更換色譜柱。

　　10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常，維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置。

　　二：基線不平原因很多，可根據譜圖的表現分析：

　　1.一直上揚或下降型：柱環境平衡慢，pH不對，流動相酸揮發等，有時和梯度洗脫也相關; 小幅緩慢波動(5-10min)：溫度不穩; 較大幅的波動：考慮流動相不均勻;

　　2.很高很寬的峰：流通池有氣泡或被污染; 無規則上下波動：如果是舊柱子，考慮柱子污染，不容易沖平。

　　3.檢查出發點不外乎幾點：柱子，流動相，柱溫，檢測器。

　　4.可通過更換條件檢查哪里出了問題，看你說的像是流動相的問題，你看看不用TBA，用同樣洗脫強度的乙睛-水行不行。

　　HPLC 基線問題匯總

　　1.液相系統沒有平衡好，柱子里的流動相一直在變化，在檢測器里面的吸收就會一直變化，導致基線波動的發生;梯度時如果其實比例的流動相平衡時間過短也會造成基線波動;

　　2.實驗室環境不穩定(比如溫度忽高忽低，氣流不斷變化等)，這對于沒有柱溫箱或只有單向溫度變化的HPLC儀器的影響尤其明顯;即使有比較好的柱溫箱時，也要注意別讓空調的出風口一直對照儀器吹，那樣基線也可能會波動;此外實驗室有電磁干擾時，也有可能會導致此問題的發生;

　　3.檢測器的流通池被污染，造成吸收的不恒定，此時需要清洗流通池;

　　4.檢測器燈能量不足時，吸收會變得不穩定，這時基線一般也不穩定，特別是在低波長處尤為明顯;

　　5.當使用低波長檢測時，有時流動相會使用兩相或以上的等度，這時混合器的很小的混合比例的誤差都會被放大，很有可能會使基線發生波動，這時將流動相按比例混合到一個通道里時，一般都會使情況改善很多;

　　6.流動相里的有機相的截止波長最好要大于檢測波長20nm以上，這一點切記，比如甲醇的截止波長是210nm，乙腈是190nm。當使用230nm以下的檢測波長時，如果條件允許，最好使用乙腈，可以避免基線波動，其余類推;

　　7.儀器出現問題也會造成基線波動，比如(1)流動相過濾頭堵塞、入口主動閥濾芯污染、單向閥被污染物堵塞、泵頭有氣泡、比例閥出故障、系統流路漏液，比如管路裂開、peek接頭沒完全連上色譜柱而導致的泄露等;

　　8.沒有脫氣機的儀器，當流動相未脫氣或脫氣未徹底時，基線也會波動;有脫氣機的每次使用前都要檢查一下是否正常工作;

　　9.當大家使用梯度作為組分洗脫方式的時候，有條件的最好使用超純水，磷酸鹽、三乙胺等固體液體加入試劑也最好使用HPLC級別的，因為在梯度中隨著有機相(洗脫力較強)的不斷增加，流動相系統里的雜質會在基線上反映出來，導致出現鬼峰或基線波動;

　　10.流動相中的有機相和緩沖液的比例一定要注意調配好，緩沖液的比例不能過大，要不然會出現緩沖鹽在柱子里析出的情況，這樣不但會造成基線波動的發生，甚至會造成色譜柱毀壞;

　　11.當色譜柱被污染時，也會造成基線波動，這里尤其要注意的是大家在做合成中控實驗的時候，最好不要用合成的原始反應液直接進樣，因為原液里面有很多非極性或極性很小的化合物，一旦進入到反相色譜柱里和非極性的C18發生相互作用，很可能就洗脫不下來使色譜柱變性或者慢慢的被洗脫下來，造成以后的分析出現不穩定的鬼峰或者基線波動;

　　12.一些比較老的液相儀對電壓要求很高，電壓有點起伏檢測器就會反映教明顯，比如老的惠普和島津等儀器，這時需要配一個穩壓電源來解決此問題;此外儀器和電腦之間連接的數據線出問題或老化也可能會使基線波動。

　　GC 基線問題總結

　　所謂基線不穩定，也就是基線的噪音、漂移以及該檢測器的基流等超出了儀器所要求的最低指標。引起基線不穩的因素很多，如外圍條件、工作站、電路、氣路都有可能。我們就我們所知道的列出以下幾種。

　　1、在我們做煤氣時曾經遇見過由于載氣的純度不夠而產生基線不穩，通過更換載氣問題解決。

　　2、有一次工作中我們發現基線不穩，我們通過檢查發現載氣壓力開的太小，我們通過調整問題得以解決，后來經過上網查證，發現載氣總壓力小于0.2Mpa就可能引起基線不穩定。另外載氣壓力若不穩定、載氣流速過高、以及穩定閥、穩流閥控制精度差，也會導致基線不穩，穩定載氣壓力后可解決。

　　3、由于儀器接地不好導致基線不穩。我們的有些儀器非常靈敏，記得我們以前的高麥色譜，因為接地線沒有弄好，導致基線很亂。還有放置儀器的地方機械振動太大導致基線不穩。將儀器放到合適的地方解決。

　　4、系統某處泄漏導致基線不穩。檢查隔墊、柱子連接處看是否有漏氣。

　　5、隔墊用的時間過長，被污染會有殘渣而產生噪聲，從而基線不穩，更換隔墊或者清洗襯管可解決。

　　6、FID氣體配比不合適導致火焰不穩，從而反映出基線不穩。調整氣體配比可解決此問題。

　　7、氣路出口管道中有冷凝物或異物，通過清理解決。

　　8、柱箱或者檢查器溫度不穩定導致基線不穩，通過調整柱箱或者檢測器溫度解決，若是溫度控制出現問題，進一步修理可解決問題。

　　9、柱填充物松動，柱中固定相流失導致基線不穩，更換色譜柱解決。

　　10、熱導池污染，清理檢測器。

　　11、樣品太臟導致基線不穩。過濾或者蒸餾處理樣品后再做。

　　12、電源電壓太低或波動太大，通過調整可解決(網上查取)。