生物院原代T細胞基因編輯和艾滋病基因治療研究獲進展
6月9日，基因治療領域權威雜志Human Gene Therapy在線發表了中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院陳小平課題組的最新研究成果。該研究首次利用最新的CRISPR/Cas9基因編輯技術，對人原代CD4+T細胞的兩個重要受體CXCR4和CCR5基因進行雙敲除，并對基因修飾過的T細胞進行體外的攻毒試驗，證明雙敲除的CD4+T細胞可以同時抵御X4-嗜性和R5-嗜性的HIV-1病毒株感染，為未來開展基于T細胞的艾滋病基因治療提供了更為高效和安全的技術平臺。該成果是博士研究生余松林等在導師陳小平指導下完成的。 CD4+T細胞是HIV-1感染人體的主要靶細胞，也是艾滋病基因治療的重要功能性細胞。CCR5是HIV-1感染CD4+T細胞的主要共受體。隨著病毒感染的推進，病毒嗜性從R5-嗜性向X4-嗜性轉變，并最終導致患者進展到AIDS期。因此，對于慢性期HIV-1感染者，同時敲除CXCR4和CCR5將可能阻斷任何單一嗜性和雙嗜性病......閱讀全文
生物院原代T細胞基因編輯和艾滋病基因治療研究獲進展
6月9日，基因治療領域權威雜志Human Gene Therapy在線發表了中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院陳小平課題組的最新研究成果。該研究首次利用最新的CRISPR/Cas9基因編輯技術，對人原代CD4+T細胞的兩個重要受體CXCR4和CCR5基因進行雙敲除，并對基因修飾過的T細胞進行體外
PNAS：T細胞阻斷艾滋病病毒作用機理被揭示
美國杜克大學和美國西奈山醫學院的科學家揭示了一種宿主蛋白在抑制艾滋病病毒復制過程中發揮其重要作用的機理。研究人員稱，該發現或許能為艾滋病的預防和治療提供新的思路。相關論文發表在最新一期的美國《國家科學院院刊》（PNAS）上。 據介紹，CD8+T細胞是人體中一種重要的免疫細胞，在艾滋病
T細胞阻斷艾滋病病毒的作用機理被揭示
美國杜克大學和美國西奈山醫學院的科學家揭示了一種宿主蛋白在抑制艾滋病病毒復制過程中發揮其重要作用的機理。研究人員稱，該發現或許能為艾滋病的預防和治療提供新的思路。相關論文發表在最新一期的《美國國家科學院院刊》上。 據介紹，CD8+T細胞是人體中一種重要的免疫細胞，在艾滋病感染
NEJM頭條：艾滋病基因治療傳捷報
來自賓夕法尼亞大學的研究人員，成功對12名HIV陽性患者的免疫細胞進行遺傳工程改造使之能抵御感染，并降低了一些完全脫離抗逆轉錄病毒藥物治療(ADT)患者的病毒載量——其中一名患者已無法檢測到HIV病毒水平。這項研究是首次報道在人類中使用基因編輯方法，研究結果發表在《英格蘭醫學雜志》（NEJM）上
原代T細胞研究系統揭示TCR信號傳導分子動態相互作用
T淋巴細胞是獲得性免疫的核心組成部分，在抗感染、抗腫瘤免疫應答中發揮至關重要的作用。T淋巴細胞識別抗原依賴T細胞受體TCR，后者主導T細胞活化增殖信號的傳導。近年來提高T淋巴細胞應答能力、阻斷T淋巴細胞功能衰竭被證實為部分惡性腫瘤治療的有效途徑，T淋巴細胞的基礎和應用研究成為目前最熱門的話題之一
原代細胞的培養
原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。[1] 最常用的原代細胞的培養有組織塊培養和分散細胞培養
原代細胞的釋義
動物組織經胰蛋白酶等消化、分散，獲得單個細胞，再生長于培養皿中。大多數組織可以制備原代細胞，但生長的快慢及難易程度不一。腎和睪丸最常用，甲狀腺細胞生長較慢，只用于某些特定的病毒如豬傳染性腸胃炎病毒的培養。
細胞原代培養
一、原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。二、儀器、材料及試劑儀器：培養箱（調整至37℃），培養瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術
原代細胞分離技術
實驗概要本文介紹了原代細胞分離技術，包括懸浮細胞的分離方法和實體組織材料的分離方法。實體組織材料的分離方法有機械分散和消化分離兩種。實驗步驟1. 懸浮細胞的分離方法?? 1) 將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。?? 2) 去掉上清，離心沉淀用無鈣、鎂的P
原代細胞傳代技術
一、貼壁細胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發現原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養液終止消化。4、用吸管將貼壁的細胞吹打
原代細胞鑒定技術
PriCells-原代細胞鑒定技術 一、形態學鑒定1.?在倒置顯微鏡中直接觀察活細胞的形態學特征2.?細胞染色檢查 ：a)?將無菌玻片置于細胞培養皿中，加細胞懸液后培養；b)?待細胞長滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c)?用PBS/甲醇（1:1）固定15分鐘；d)?棄固定
原代細胞的作用
原代細胞可用來轉染 siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內的小分子 RNA 和 DNA，可轉染絕大多數原代細胞。目前，無論國外還是國內，原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。原代細胞能夠高效轉染絕大多數原代細胞
原代細胞分離技術
1. 懸浮細胞的分離方法 1) 將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。 2) 去掉上清，離心沉淀用無鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復兩次。 3) 用培養基重懸，調整適當細胞濃度后分瓶培養。 4) 如選用懸液中某種細胞，
原代細胞應用困局
經過一次傳代后，原代細胞培養物就會成為二級細胞培養物，也稱為細胞株。然而，盡管稱為細胞株，但其壽命是有限的（除非如前所述永生化）。這種有限的分裂能力體內的細胞相似，一旦細胞在體內完全分化以發揮其特殊功能，細胞將停止增殖-這是固有的癌癥保護性衰老過程。此外，某些原代細胞有絲分裂后，無論是在體內或體
什么是原代細胞？
原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物
什么是原代細胞
原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的
原代細胞分離技術
取人或動物體內（或胚胎）的組織，將其剪碎至1mm3的組織塊，再采用的如下方法進行分離培養：一、懸浮細胞的分離方法1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。2、去掉上清，離心沉淀用無鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復兩次。3、用培養基
原代細胞組成結構
原代細胞組成結構1、 血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組
原代細胞復蘇技術
.?原代細胞凍存復蘇技術簡介在ELISPOT檢測的應用中，往往需要用到凍存的淋巴細胞樣品作為檢測細胞。由于ELISPOT檢測的是細胞的免疫功能，不僅僅需要保持細胞的存活率，而且還要保證細胞的功能不發生變化。傳統的細胞凍存方法通常是為了保存細胞株，對細胞存活率的要求不高，更沒考慮保持細胞原有的免疫狀態
原代細胞永生化？
原代細胞因它可以模仿人體的新陳代謝逐日成為科研學者青睞的研究工具，但是原代細胞曾是出了名的難培養，需要耗費大量的時間、成本和資源。即使細胞捱過了極其嚴苛的解離步驟，但污染仍然是一個隱患，有可能讓幾天的成果化為烏有。此外還存在其他細胞污染、生長緩慢以及數量有限的問題。 細胞系因容易培養且產量可觀
原代細胞的取材
一、取材的基本要求（1）取材要注意新鮮和保鮮新鮮組織易于培養成功，取材時應盡量在4~6h內能制作成細胞，盡快入箱培養，若不能即時培養，應將組織浸泡于培養液內，于4℃存放。若組織塊較大，應在清除表面血塊、壞死組織、脂肪和結締組織后，切碎于培養液內4℃存放，但時間不能超過24h。對于已切碎的組織或血液、
原代細胞純化方法
（1）胰蛋白酶 純化法 ●在去除不需要的組織后，使用無菌的解剖刀和剪子把剩余的組織切成3~4 mm小片，通過懸浮在無鈣鎂的平衡鹽溶液中清洗組織碎片。讓組織碎片沉淀，去除上清液。重復清洗2到3次。 ●將盛有組織碎片的容器置于冰上，去除殘留的上清液。加入0.25%溶解在無鈣鎂的平衡鹽溶液中的胰蛋
武大牽頭艾滋病基因治療研究－探索艾滋病功能性治愈
??????? 5月17日，國家衛生計生委艾滋病防治科技重大專項“基于自體造血干/祖細胞遺傳改造的艾滋病基因治療”在武漢大學啟動。牽頭開展艾滋病基因治療研究，艾滋病人有望獲治愈。 湖北省科技廳副廳長鄭春白、處長吳月朗，湖北省衛生計生委科教處處長林俊杰，武漢大學副校長舒紅兵，復旦大學遺傳工程國家重點
體細胞基因治療
中文名稱體細胞基因治療英文名稱somatic cell gene therapy定 義將目的基因轉入生物體的非生殖細胞以治療遺傳疾病的方法。應用學科遺傳學（一級學科），細胞遺傳學（二級學科）
體細胞基因治療
體細胞基因治療：體細胞基因治療(somatic cell gene therapy)是指將正常基因轉移到體細胞，使之表達基因產物，以達到治療目的。這種方法的理想措施是將外源正常基因導入靶體細胞內染色體特定基因座位，用健康的基因確切地替換異常的基因，使其發揮治療作用，同時還須減少隨機插入引起新的基因突
艾滋病檢測—CD4+T淋巴細胞檢測的介紹
HIV感染人體后，出現CD4+T淋巴細胞進行性減少，CD4+/CD8+T細胞比值倒置，細胞免疫功能受損。如果進行HAART，CD4+T淋巴細胞在病程的不同階段可有不同程度的增加。目前常用的CD4+T淋巴細胞亞群檢測方法為流式細胞術，可以直接獲得CD4+T淋巴細胞數絕對值，或通過WBC分類計數后換
原代細胞的培養方法
原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。?最常用的原代細胞的培養有組織塊培養和分散細胞培養。組織塊培養
原代細胞凍存技術
?1、選用生長情況好，數量較多的原代細胞，凍存前一天換液一次。2、貼壁細胞需用0.25％胰酶常規消化將細胞消化下來，將細胞懸液收集至離心管中。3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。4、沉淀加含DMSO的培養液，計數，調整至（1-10）×106/ml。5、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。6、密封凍
原代細胞如何傳代接種？
原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的
原代細胞傳代基本技術
1. 選用原代細胞生長狀態好（90－95％），生長數量大于5×10?進行傳代。2. 吸除原代細胞培養液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養瓶2次。3. 3ml細胞消化液加入細胞培養瓶，輕輕搖動，使細胞消化液覆細胞培養瓶底。（建議使用賽奧斯的原代細胞消化液。）4. 細胞培養瓶置于5%CO2